Título :	Clonación y expresión de una isoperoxidasa de nabo (Brassica napus var. purple top white globe) en un sistema bacteriano.
Autor(es):	Alejandra Medina Valle
Palabras clave:	Peroxidasa Expresión heteróloga Nabo
Fecha de publicación :	nov-2009
Editorial :	Universidad Autónoma de Querétaro
Facultad:	Facultad de Química
Programa académico:	Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos
Resumen:	Las peroxidasas son enzimas que catalizan la oxidación de una amplia variedad de sustratos, utilizando peróxido de hidrógeno. Las peroxidasas de plantas (clase III), contienen un grupo hemo, dos átomos de calcio, glicosilaciones y puentes de cisteína en posiciones conservadas. Están involucradas en los procesos de lignificación, defensa contra ataques de patógenos, respuesta a heridas en los tejidos y en el crecimiento. Comercialmente, se utilizan en inmunoensayos, kits de análisis y degradación de compuestos fenólicos. La mayor parte de la producción mundial de peroxidasa se obtiene del rábano picante (Armoracia rusticana), el cual tiene baja disponibilidad en México por lo que una fuente alternativa es el nabo (Brassica napus). El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar el gen de una peroxidasa de nabo en Escherichia coli y determinar algunas características biquímicas de la proteína recombinante. Se extrajo RNA total de nabo de 5 semanas de edad, se sintetizó el cDNA y se amplificó en gen de peroxidasa (BnPA). La secuencia que codifica para la proteína madura se subclonó en el vector pGEM-T utilizando oligonucleótidos con sitios de restricción, y se obtuvo la secuencia nucleotídica. La secuencia de aminoácidos presentó tres diferencias con la secuencia reportada en NCBI con número de acceso AY423440. Posteriormente se clonó en el vector pET28a(+) y se expresó en E. coli (BL21) DE3. Las células se sometieron a tratamiento ultrasónico y la proteína recombinante (pI 4.6) fue purificada a partir de cuerpos de inclusión y solubilizándola después en urea 6 M. El rendimiento de peroxidasa recombinante fue de 0.44 mg BnPA/mg de proteína (10 mg/L). Finalmente fue plegada in vitro en medio con calcio, glutatión oxidado y hematina a pH 8. Su actividad enzimática se midió monitoreando la oxidación del ABTS y fue de 522 U/mg de proteína. La peroxidasa recombinante puede ser de importancia para la destoxificación de agua conteniendo compuestos fenólicos.
URI:	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/6750
Otros identificadores :	1270 - RI001659.PDF
Aparece en:	Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos

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