Título :	Purificación por métodos tradicionales, por absorción específica y estabilidad de la bacteriocina producida por Enterococcus faecium UQ1
Autor(es):	Irma Araceli Rivera Barbosa
Palabras clave:	Bacteriocinas Enterococcus faecium Purificación
Fecha de publicación :	2000
Editorial :	Universidad Autónoma de Querétaro
Facultad:	Facultad de Química
Programa académico:	Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos
Resumen:	Las bacteriocinas son agentes antimicrobianos de origen natural, de naturaleza proteica que se consideran como una posible alternativa para la conservación de alimentos. El objetivo de este trabajo fue purificar mediante métodos tradicionales y de adsorción específica la bacteriocina producida por Enterococcus faecium UQ1, así como caracterizarla parcialmente. La actividad se cuantificó por el método de difusión en agar, usando como microorganismo indicador Micrococcus luteus NCIB 8166 mediante el método de dilución crítica y expresándose como unidades arbitrarias (UA). Para la purificación tradicional se emplearon precipitaciones con sulfato de amonio y acetona, cromatografía de intercambio aniónico y filtración en gel. De la purificación tradicional se obtuvieron dos picos con actividad (A y B) representado el 19% de la actividad inicial y el 1 % de la proteína total inicial. El pico A tuvo una actividad específica de 780 UA/mg, mientras que el B tuvo una actividad de 670 UA/mg, con un peso molecular estimado por filtración en gel de ~2400 Da. Mediante electroforesis en condiciones reductoras, la fracción A presentó dos bandas de pesos moleculares de 60 y 66 KDa. La actividad antimicrobiana en este intervalo de pesos moleculares se comprobó por un zimograma, y las bacteriocinas de alto y bajo peso molecular no presentaron efecto sinergista. Se logró purificar una de las bacteriocinas a homogeneidad mediante el método de adsorción específica, seguido de cromatografía de intercambio catiónico. Su peso molecular determinado por electroforesis en el sistema Tris-tricina fue de 4500 Da. Probablemente esta bacteriocina corresponde a la fracción B. La actividad específica obtenida fue de 2.5 x 105 UA/mg, con un factor de purificación de 1070, recuperándose el 1.8% de la actividad inicial. El extracto libre de células concentrado (ELCC) resultó ser estable en un amplio rango de pH (2-12), conservando el total de su actividad por 5 h a 4ºC. El ELCC a pH 6.5 mantuvo su actividad durante 10 semanas en congelación (- 20ºC) y 5 días en refrigeración (4ºC). Las bacteriocinas producidas por E. faecium UQ1 perdieron el 50% de su actividad por calentamiento a 121°C por 15 min (esterilización húmeda). El ELCC presentó actividad contra células en crecimiento de Listeria monocytogenes Scott A, presentando una reducción de 6 log comparado con el control, después de 17 h de haberse adicionado. Las bacteriocinas producidas por E. faecium UQ1 pueden ser de interés para su aplicación como barrera adicional de origen natural, en la conservación de los alimentos.
URI:	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/5144
Otros identificadores :	2424 - RI004381.pdf
Aparece en:	Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos

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