Título :	Estandarización de la técnica de amplificación isotérmica mediada por horquillas (LAMP) acoplado a nanopartículas de oro coloidal para la detección de Pseudomonas aeruginosa resistente a carbapenémicos en muestras de ADN de aislamientos clínicos
Autor(es):	Scarlette Dlydia Beltrán Hidalgo
Palabras clave:	LAMP resistencia a carbapenémicos Nanopartículas de oro Pseudomonas aeruginosa blaIMP
Área:	INGENIERÍA Y TECNOLOGÍA
Fecha de publicación :	4-ene-2022
Facultad:	Facultad de Química
Programa académico:	Maestría en Química Clínica Diagnóstica
Resumen:	La infección ocasionada por P. aeruginosa, resistente a carbapenémicos, causan miles de muertes en pacientes críticos, por no tener un tratamiento adecuado. Las técnicas de detección de este microorganismo, así como su sensibilidad a estos antibióticos son tardadas e inoportunas. Uno de los mecanismos más importantes de resistencia a los carbapenémicos es la producción de la enzima imipenemasa, codificada por el gen blaIMP. La detección molecular del gen blaIMP por PCR es rápida, sin embargo, requiere de equipos sofisticados y personal especializado. En el año 2000, Notomi y col. describieron la técnica LAMP, la cual permite la amplificación de ADN con alta especificidad, sensibilidad, rapidez y sin el uso de equipo costoso. Recientemente se reportó el diagnóstico P. aeruginosa resistente a carbapenémicos mediante la técnica LAMP basada en el gen de blaIMP (Kim y et al., 2016), analizado mediante una corrida electroforética. Por ello, el objetivo de este estudio fue implementar la técnica de LAMP acoplada a nanopartículas de oro (AuNP), para la detección visual del gen blaIMP en muestras de ADN de P. aeruginosa resistente a carbapenémicos de aislamientos clínicos. El resultado mostró que la reacción de LAMP se llevó a una temperatura óptima de 60 ° C durante 35 min. La detección de amplificación se realizó mediante la hibridación de una sonda de ADN monocatenario acopladas a AuNP, complementaria al ADN diana, seguida de agregación de partículas inducida por sal para visualizar el un cambio colorimétrico. Los resultados nos muestran que la unión del gen blaIMP a la sonda en las AuNP causó un cambio de color de rosa a gris, visible a simple vista a 10 min de incubación con 400 mM de NaCl. El ensayo de LAMP/AuNP fue un método específico para el gen blaIMP en P. aeruginosa resistente a carbapenémicos, en comparación con el colorante HNB que causo falsos positivos. En conclusión, la técnica de LAMP acoplada a las AuNP es una alternativa de la técnica LAMP como un método visual, rápida, simple y específico para la detección de la amplificación del gen de resistencia bacteriana blaIMP en muestras de ADN de P. aeruginosa de aislamientos clínicos.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/2546
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