Título :	Identificación de enzimas que participan en la ruta de biosíntesis de folatos, en cladodios de nopal (Opuntia ficus indica)
Autor(es):	Tania Breshkovskaya Ortiz Escobar
Palabras clave:	Folates Folatos Folic acid Nopal Nopal Ácido fólico
Área:	INGENIERÍA Y TECNOLOGÍA
Fecha de publicación :	nov-2008
Facultad:	Facultad de Química
Programa académico:	Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos
Resumen:	El nopal ha sido una fuente alimenticia en México desde la antigüedad, tiene gran importancia ecológica, económica y nutrimental; sin embargo, los estudios sobres sus beneficios a la salud y aspecto nutrimental son limitados. El análisis sobre la composición de alimentos de consumo cotidiano como el nopal puede proporcionarnos información valiosa sobre los efectos que se puedan tener al ser consumidos, tal es el caso del papel que juegan algunos compuestos en el tratamiento o prevención de enfermedades, como la fibra dietaria, antioxidantes, fitoquímicos y ácido fólico. En el caso del ácido fólico o folato se ha puesto especial atención por los efectos que se tienen si no hay una ingesta adecuada de este metabolito y la aparición de enfermedades como los defectos del cierre del tubo neural, cáncer, anemia megaloblástica, y de tipo cardiovascular. El objetivo de este trabajo fue cuantificar la concentración de folatos en cladodios de nopal (Opuntia ficus indica) e identificar enzimas que participan en su biosíntesis, mediante análisis bioquímico y molecular. La determinación de folatos se efectúo por ensayo microbiológico y por ELISA. La identificación de las secuencias genéticas que codifican para las enzimas guanosin trifosfato ciclohidrolasa (gtpch1), aminodeoxicorismato sintasa (adcs), 6- hidroximetil-7,8-dihidropterina pirofosfocinasa/ 7,8- dihidropteroato sintasa (hppk/dhps) se determinó por PCR, secuenciación, alineamiento y comparación. Mediante el análisis microbiológico empleando tres enzimas se cuantificó el contenido de folatos alcanzando una concentración de 5.094 ng/g. Por ELISA se obtuvieron valores de 5.5 a 5.6 ng/g, lo que sugiere la coincidencia de ambos métodos. Para comprobar la existencia de los genes en nopal se realizaron análisis tipo Southern blot. Se lograron identificar las secuencias genéticas de las enzimas adc sintasa y gtp ciclohidrolasa 1. En el análisis Southern blot se lograron detectar señales positivas para las enzimas gtp ciclohidrolasa 1 y hppk/dhps. Nopal (Opuntia ficus indica) is an important food source in Mexico since ancient times, because its economical, ecological and nutraceutical value, however studies on its health benefits and nutritional aspects have been scarce. The analysis on the composition of staple foods such as nopal can provide valuable information of the benefits of this crop on human health. Some of the compounds found in nopal, such as dietary fiber, antioxidants, folic acid and phytochemicals are used in the treatment or prevention of chronic diseases. Folic acid or folate is of great interest in human health since a low intake of this metabolite is related to defects in the neural tube, cancer, megaloblastic anemia and cardiovascular diseases. The aim of this study was to identify the enzymes involved in the biosynthesis route of folates in cladodes of nopal by molecular and biochemical analysis. The identification of the genetic sequences that codifing for Guanosine triphosphate gtp cyclohydrolase (gch1), aminodeoxychorismate synthase (adcs), 6-hidroxymethyl-7,8-dihydropterine pyrophosphokinase/7,8- dihydropteroate synthase (hppk/dhps) enzymes were determined by sequencing, alignment, comparison and PCR. Southern blot analysis was done to assess the presence of genes in nopal. The folate assessment was made by folate microbiological assays and by ELISA. The microbiological assays showed that folate levels were of 5.09 ng/g and those by ELISA were 5.5 to 5.6 ng/g, wich demonstrated the coincidence of both techniques. In this study the genetic sequences of adc synthase and gtp cyclohydrolase 1 enzymes were identified. Southern blot analysis showed the positive signals for gtp cyclohydrolase 1 and hppk/dhps enzymes.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/806
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