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Title: Purificación de dos isoenzimas de peroxidasa de nabo (Brassica napus l. Var. Purple top white globe) y su uso en la producción de anticuerpos policlonales en conejo
metadata.dc.creator: Brisia Villalón Corona
Keywords: Peroxidasa
Purificación de proteínas
Anticuerpos policlonales
metadata.dc.date: 2001
Publisher: Universidad Autónoma de Querétaro
metadata.dc.degree.department: Facultad de Química
metadata.dc.degree.name: Ingeniería en Químico de Alimentos
Description: El objetivo del presente trabajo fue purificar dos isoenzimas de peroxidasa de nabo (Brassica napus L. var. purple top white globe) y utilizando éstas como antígenos, ver la posibilidad de obtener anticuerpos específicos que pudieran ser utilizados en el futuro en columnas de inmunoafinidad que disminuirían el número de etapas involucradas en la purificación de la peroxidasa. Se purificaron dos isoenzimas de peroxidasa, P1 (39 kDa) y P2 (36 kDa) a partir de nabo (Brassica napus L. var. purple top white globe), mediante técnicas cromatográficas, verificando su pureza por electroforesis. Las actividades específicas fueron de 618 U/mg para P1 y 1059 U/mg para P2 con factores de purificación de 118 y 203 respectivamente. El rendimiento de actividad fue de 13% para P2 y 7.8 % para P1. Las isoperoxidasas purificadas fueron usadas como antígenos para la inducción de anticuerpos policlonales, AbP1 y AbP2, en conejos de raza New Zealand. Los anticuerpos producidos se detectaron mediante transferencia Western. Usando ensayos inmunológicos, Western y ELISA, se obtuvo un 44.7 % de reacción cruzada entre P1 y AbP2 y 46.3 % entre P2 y AbP1 indicando que la estructura tridimensional de P1 y P2 son muy semejantes. Se realizaron reacciones cruzadas con una isoperoxidasa de brócoli, corroborando que entre las isoperoxidasas purificadas y la de brócoli existen determinantes antígenicos estructuralmente relacionados, no obstante la diferencia en sus pesos moleculares. Una remoción del 90 % de la porción glicosídica de las dos isoperoxidasas de nabo, no impidió su reconocimiento inmunológico.
URI: https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/7506
Other Identifiers: 1647 - RI003596.pdf
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