"Cyclospora cayetanensis es un protozoario que ocasiona severas infecciones
gastrointestinales en humanos. La infección es adquirida a través del consumo de
alimentos y agua contaminada con oocistos del parásito. En EE.UU. se estima
que este parásito ha ocasionado 1,481 casos durante los recientes brotes de
ciclosporiasis; generando pérdidas económicas superiores a los 2 millones de
dólares. Los últimos brotes de ciclosporiasis en EE.UU. se han asociado al
consumo de cilantro producido en el estado de Puebla, México. La restricción de
la importación de este producto generó pérdidas de ~60 millones de pesos en
México. Las limitaciones técnicas para la identificación del parásito en alimentos,
dificultan la vigilancia epidemiológica de C. cayetanensis. Convencionalmente, la
detección de C. cayetanensis se basa en la identificación morfológica de oocistos
mediante microscopía óptica; sin embargo, este método es laborioso, poco
sensible y no específico. En el presente trabajo, se estandarizaron ensayos
moleculares para la detección, cuantificación y genotipificación de C.
cayetanensis en matrices alimentarias (frutillas y hortalizas) y ambientales. Para
esto, se obtuvieron muestras de suelo, lavados de frutas y hortalizas que fueron
sometidos al proceso de extracción de DNA. La detección de C. cayetanensis se
realizó a través de la amplificación del gen 18S rRNA. Los ensayos de PCR
anidada y cuantitativa (qPCR) fueron capaces de detectar concentraciones de 10
oocistos/g muestra y la estimación de oocistos fue comparable a las
concentraciones estimadas por técnicas convencionales de microscopia óptica. El
análisis filogenético del gen 18S rRNA, identificó seis genotipos de C.
cayetanensis prevalentes en ocho regiones geográficas del mundo. Estas
herramientas moleculares permitirán la rápida y oportuna detección del parásito
en matrices alimentarias o en las unidades de producción agrícola. Además, el
presente trabajo provee la primera evidencia de genotipos de C. cayetanensis
endémicos en México."
"Cyclospora cayetanensis, a coccidian parasite, causes gastroenteritis in humans.
This pathogen is transmitted by the ingestion of sporulated oocysts present in
contaminated food or water. In the USA, C. cayetanensis outbreaks generate
~1,481 cases and economic losses >2 million dollars annually. The latest
ciclosporiasis outbreaks in the USA were linked to consumption of cilantro
imported from Mexico. These outbreaks caused import prohibitions generating ~3
million dollars in economic losses in Mexico. An important limitation for detecting
this pathogen in foods is the lack of rapid, specific and sensible surveillance tools.
The main goal of the present study was to standardize and validate a nested PCR,
a qPCR and phylogenetic assays for the detection, quantification and genetic
characterization of C. cayetanensis in food and stool samples. The nested PCR
assay was able to detect as few as 10 oocyst per gram of sample. Performance of
the qPCR was comparable to oocyst counts by the gold standard microscopy
method. The phylogenetic analysis of the 18S rRNA gen allowed the identification
of six C. cayetanensis genotypes prevalent in eight different countries. Taken
together, these results indicate that the use of these molecular assays for
detection, quantification and genetic characterization of C. cayetanensis could be
an important tool for the surveillance of this pathogen in food and clinical samples.
Importantly, the present study provides the first information of C. cayetanensis
genotypes endemic in Mexico."
