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Título:	Implementación de marcadores de selección en Trichoderma atroviride
Autor(es):	Juana Jazmín Esquivel Méndez
Palabras clave:	Biología y Química Ciencias de la Vida Biología molecular
Fecha de publicación :	8-may-2023
Editorial :	Ciencias Naturales
Páginas:	1 recurso en línea (105 páginas)
Folio RI:	CNLIN-227720
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Licenciatura en Microbiología
Resumen:	"Las especies del género Trichoderma son hongos saprofitos de importancia industrial para la producción de enzimas, metabolitos y utilizados ampliamente en la agricultura para el control biológico de hongos fitopatógenos. Trichoderma atroviride tiene su genoma secuenciado y es utilizado como modelo para estudiar su capacidad antagónica, el metabolismo, la morfogénesis y la interacción con plantas. Varias herramientas moleculares han sido establecidas para la manipulación genética de este hongo con el objetivo de estudiar las funciones de sus genes; sin embargo, existen limitados marcadores seleccionables para su transformación genética. En esta investigación se caracterizaron genes que confieren resistencia a nourseotricina, a benomilo y a carboxina. El gen nat1 seleccionable con nourseotrIcina, se clonó en el plásmido pCB1004. Se estableció la técnica de PCR doble unión para realizar una mutación puntual en el gen tub2 de T. atroviride, cambiando una histidina por una tirosina en la posición 6 de la beta-tubulina. También se realizó un cambio puntual de la histidina por una leucina en la posición 243 de la succinato deshidrogenasa (sdh) que confiere resistencia a carboxina, sin embargo, no se incluyó el promotor con el objetivo de que solo las transformantes que integraran el plásmido por recombinación homóloga fueran capaces de crecer en presencia de carboxina; sin embargo, no fue posible obtener transformantes resistentes, indicando que es esencial incluir la región promotora a un marcador seleccionable para su funcionalidad en T. atroviride. La mutación en el gen tub2 confirió resistencia a benomilo, generando transformantes estables por la integraron del ADN por recombinación homóloga. La caracterización fenotípica indica diferente resistencia al benomilo en micelio y en espora, sugiriendo una función específica de desarrollo del gen tub2. El gen nat1 que codifica para la N-acetil transferasa confirió resistencia a nourseotricina, pero las transformantes fueron inestables cuando se crecen sin selección, perdiendo resistencia y el plásmido en la primera generación de esporas. Se utilizó el vector pBC-NTC para experimentos de complementación de mutantes carentes del gen Nik1 que codifica una histidina cinasa y el gen cla4 que codifica una proteína cinasa MAPKKKK, pero no se tuvo éxito. Con el gen sdh con resistencia a carboxina no se logró obtener transformantes de Trichoderma, probablemente por la ausencia del promotor en la construcción. En conclusión, se implementó el marcador seleccionable heterólogo nat1 que funcionó con alta eficiencia de transformación, generando transformantes inestables, y un marcador seleccionable homólogo tub2 con baja eficiencia de transformación, pero generando transformantes estables. Los resultados demuestran el potencial uso de estos marcadores de selección para el análisis funcional de genes en T. atroviride."
URI:	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/7980
Aparece en:	Licenciatura en Microbiología

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