Título :	Clonación molecular, expresión heterologa y purificación de YFML: una RNA helicasa de la familia DEAD
Autor:	Anibal Raziel Lara Vázquez
Palabras clave :	Clonación molecular Expresión heterologa DEAD
Fecha de publicación :	2010
Editorial :	Universidad Autónoma de Querétaro
Facultad:	Facultad de Química
Prográma académico:	Ingeniería en Biotecnología
Resumen:	Las proteínas de caja DEAD son proteínas que se encuentran dentro de una amplia variedad de organismos y se caracterizan por tener actividad de tipo helicasa dependiente de ATP. Se encuentran involucradas en aspectos básicos del metabolismo de los ácidos nucleicos. Las constantes de actividad enzimática obtenidas para algunas de ellas han reflejado diferencias y similitudes significativas entre especies relacionándolo con los aspectos fisiológicos y bioquímicos de cada especie. En B. subtilis, una bacteria de gran importancia a nivel industrial, y principal modelo de estudio de los gram positivos hay 5 proteínas de caja DEAD (YfmL, YdbR, YqfR, YxiN y YprA) de las cuales solo YxiN y YdbR han sido caracterizadas bioquímicamente. Con el fin de poder hacer un análisis comparativo de las funciones de estas proteínas con otras ya previamente caracterizadas, en este trabajo se obtuvo la proteína YfmL (42 kDa), para ello se extrajo el DNA genómico de la cepa PY79 de B. subtilis y del cual se amplificó el gen yfmL de 1128 pb por PCR. Posteriormente se digirió el producto de PCR yfmL con XbaI y EcoRI y el vector de expresión pCold I para formar la construcción pCold-yfmL, la cual fue transformada en la cepa huésped E. coli TOP10 por electroporación. Las colonias transformantes fueron analizadas por PCR y posteriormente se extrajeron los plásmidos. Se confirmó la presencia del inserto mediante la digestión enzimática de plásmidos con XbaI y EcoRI. La cepa de E.coli BL21¿Star fue transformada con la construcción pCold-yfmL mediante choque térmico y la expresión fue inducida con IPTG 0.5 mM a 16°C por 21 horas. Posteriormente se purificó la proteína recombinante mediante cromatografía de afinidad de histidinas y finalmente por cromatografía de intercambio iónico.
URI :	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/7435
Otros identificadores :	1590 - RI003558.PDF
Aparece en las colecciones:	Ingeniería en Biotecnología

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