Título :	Clonación de una toxina formadora de poros (PFT) sintetizada por el "coral de fuego" Millepora alcicornis y caracterización de su efecto citolítico
Autor(es):	Jesús Eduardo Vega Tamayo
Palabras clave:	PFT Clonación Coral de fuego
Área:	BIOLOGÍA Y QUÍMICA
Fecha de publicación :	26-ago-2022
Facultad:	Facultad de Química
Programa académico:	Maestría en Ciencias Químico Biológicas
Resumen:	Millepora alcicornis es un importante organismo constructor de arrecifes en el Caribe Mexicano. Este cnidario es miembro de la familia Milleporidae, la cual incluye a los hidrocorales conocidos comúnmente como “corales de fuego”, debido a que producen lesiones similares a quemaduras. Los agentes causales de dichos efectos son principalmente toxinas de naturaleza proteica sintetizadas para la captura de presas y defensa, entre las que se encuentran algunas toxinas formadoras de poros (PFTs,). Las PFTs tienen un gran potencial para su aplicación en las áreas de la biotecnología, la farmacia y la agricultura. A la fecha, se desconoce la estructura química y el mecanismo de acción de las toxinas producidas por los "corales de fuego", lo cual ha impedido el diseño de terapias adecuadas para tratar la toxicidad ocasionada por estos organismos. En un estudio previo, mediante una estrategia bioinformática, nuestro grupo de trabajo detectó en el transcriptoma de M. alcicornis tres transcritos que codifican para citolisinas y un transcrito que codifica para una PFT. En este contexto, la secuencia codificante para una hidralisina se clonó en el vector pET28b entre los sitios de restricción NcoI y XhoI. Posteriormente, el vector se transformó en bacterias Escherichia coli C41 (DE3) competentes para su expresión. El análisis, mediante SDS-PAGE, del extracto conteniendo las proteínas expresadas por vía recombinante reveló la presencia de una banda a 27 kDa que concuerda con el peso molecular predicho de las hidralisinas. La determinación de la actividad hemolítica reveló que el extracto total que contenía la toxina recombinante provocaba hemólisis en eritrocitos de humano con una UH50 igual a 17.5 ± 1.015 µg/mL. No obstante, las pruebas para la determinación del blanco de unión y estimación del tamaño de poro no mostraron resultados concluyentes debido a la alta complejidad del extracto total. En conclusión, los resultados de este trabajo mostraron que es posible expresar en la cepa de E. coli C41(DE3) la PFT de tipo hidralisina identificada en el transcriptoma de M. alcicornis. Sin embargo, es necesario realizar experimentos adicionales para obtener resultados contundentes, que a la postre, ayuden a proponer a la hidralisina como un prototipo estructural para el desarrollo de herramientas biotecnológicas y/o farmacológicas.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/3891
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