Título :	Producción y estudios de caracterización de la proteína recombinante humana Lactoferrina
Autor(es):	Beatriz Liliana Álvarez Mayorga
Palabras clave:	dicroísmo circular proteínas recombinantes lactoferrina Komagataella phaffii
Área:	BIOLOGÍA Y QUÍMICA
Fecha de publicación :	21-mar-2024
Editorial :	Universidad Autónoma de Querétaro
Páginas:	1 recurso en línea (88 páginas)
Folio RI:	CNDCC-50591
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Doctorado en Ciencias Biológicas
Resumen:	Proteínas como la lactoferrina (LF) presente en la leche materna, es una de las proteínas que proporcionan una variedad de ventajas fisiológicas claves para los infantes y que han tomado interés para su producción recombinante. Muchas son las proteínas recombinantes que se pueden producir por medio de la biotecnología en microorganismos, en plantas y en la leche de ganado bovino transgénico. La producción de proteínas debe ser mejorada de sus fuentes nativas o buscar otras nuevas junto con el desarrollo de sistemas de expresión de proteínas eficientes y el avance de los protocolos de extracción de proteínas. En este estudio se produjo la proteína recombinante LF sérica humana en el sistema eucariótico de Pichia pastoris (renombrada como Komagataella phaffii), utilizando la cepa de levadura transformada con un plásmido previamente caracterizado para la expresión de la hLF, se indujo su producción en un medio de cultivo selectivo, obteniéndose un rendimiento de 0.186mg/mL de proteína excretada al medio. La proteína obtenida, se caracterizó mediante SDS-PAGE, se purificó a partir del medio de cultivo mediante cromatografía de afinidad y se determinaron parámetros termodinámicos mediante espectroscopía de dicroísmo circular (DC). Los espectros obtenidos por DC muestran que a pH alcalino la estructura secundaria de la LF nativa, así como la recombinante, cambia a una estructura desplegada, a pH ácido ambas proteínas precipitan. Mediante la respuesta de DC a diferentes pH y mediante la determinación de parámetros termodinámicos, fue posible proponer que en la producción de LF humana recombinante la forma apo de la proteína podría haberse favorecido en comparación con la LF de origen humano. Para demostrar si una LF recombinante y una LF nativa son comparables en funcionalidad para usarse en productos alimenticios, se deben realizar algunos estudios de seguridad. Sin embargo, el DC puede utilizarse como primera herramienta de inspección en la producción de proteínas recombinantes.
URI:	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/10432
Aparece en:	Doctorado en Ciencias Biológicas

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