Clonación y expresión de una isoperoxidasa de nabo (Brassica napus var. purple top white globe) en un sistema bacteriano.

Alejandra Medina Valle

Buscar

dc.rights.license	http://creativecommons.org/licenses/by-nd/4.0	es_ES
dc.contributor	Carlos Regalado González	es_ES
dc.creator	Alejandra Medina Valle	es_ES
dc.date	2009-11
dc.date.accessioned	2016-11-22T18:46:42Z
dc.date.available	2016-11-22T18:46:42Z
dc.date.issued	2009-11
dc.identifier	1270 - RI001659.PDF	es_ES
dc.identifier.uri	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/6750
dc.description	Las peroxidasas son enzimas que catalizan la oxidación de una amplia variedad de sustratos, utilizando peróxido de hidrógeno. Las peroxidasas de plantas (clase III), contienen un grupo hemo, dos átomos de calcio, glicosilaciones y puentes de cisteína en posiciones conservadas. Están involucradas en los procesos de lignificación, defensa contra ataques de patógenos, respuesta a heridas en los tejidos y en el crecimiento. Comercialmente, se utilizan en inmunoensayos, kits de análisis y degradación de compuestos fenólicos. La mayor parte de la producción mundial de peroxidasa se obtiene del rábano picante (Armoracia rusticana), el cual tiene baja disponibilidad en México por lo que una fuente alternativa es el nabo (Brassica napus). El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar el gen de una peroxidasa de nabo en Escherichia coli y determinar algunas características biquímicas de la proteína recombinante. Se extrajo RNA total de nabo de 5 semanas de edad, se sintetizó el cDNA y se amplificó en gen de peroxidasa (BnPA). La secuencia que codifica para la proteína madura se subclonó en el vector pGEM-T utilizando oligonucleótidos con sitios de restricción, y se obtuvo la secuencia nucleotídica. La secuencia de aminoácidos presentó tres diferencias con la secuencia reportada en NCBI con número de acceso AY423440. Posteriormente se clonó en el vector pET28a(+) y se expresó en E. coli (BL21) DE3. Las células se sometieron a tratamiento ultrasónico y la proteína recombinante (pI 4.6) fue purificada a partir de cuerpos de inclusión y solubilizándola después en urea 6 M. El rendimiento de peroxidasa recombinante fue de 0.44 mg BnPA/mg de proteína (10 mg/L). Finalmente fue plegada in vitro en medio con calcio, glutatión oxidado y hematina a pH 8. Su actividad enzimática se midió monitoreando la oxidación del ABTS y fue de 522 U/mg de proteína. La peroxidasa recombinante puede ser de importancia para la destoxificación de agua conteniendo compuestos fenólicos.	es_ES
dc.format	Adobe PDF	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Autónoma de Querétaro	es_ES
dc.relation.requires	No	es_ES
dc.rights	Acceso Abierto	es_ES
dc.subject	Peroxidasa	es_ES
dc.subject	Expresión heteróloga	es_ES
dc.subject	Nabo	es_ES
dc.title	Clonación y expresión de una isoperoxidasa de nabo (Brassica napus var. purple top white globe) en un sistema bacteriano.	es_ES
dc.type	Tesis de maestría	es_ES
dc.contributor.role	Director	es_ES
dc.degree.name	Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos	es_ES
dc.degree.department	Facultad de Química	es_ES
dc.degree.level	Maestría	es_ES