Los germinados de alfalfa en años recientes han adquirido gran importancia entre la población debido a sus propiedades nutritivas. Sin embargo, con frecuencia se han visto implicados en brotes de enfermedades causados por Salmonella enterica y Escherichia coli O157, debido probablemente a que generalmente se consumen crudos sin la aplicación de un tratamiento de desinfección previo que asegure la eliminación de microorganismos patógenos, o bien a que los tratamientos aplicados no son efectivos. El uso de antagonistas microbianos se ha empleado con éxito en el control de fitopatógenos; sin embargo, escasa es la información respecto a su aplicación sobre microorganismos patógenos a humanos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto antagónico de microorganismos aislados de diversas fuentes contra S. enterica y E. coli O157 durante el proceso de germinación de semillas de alfalfa. In vitro se evaluó el efecto antagónico de 39 cepas aisladas de diversas fuentes (queso, coliflor, betabel, semillas de amaranto, materia fecal de bebé y suelo de cultivo orgánico) contra S. enterica y E. coli O157. Se seleccionaron las cepas con efecto antagónico contra los patógenos y se determinó si no había antagonismos entre ellas para poder establecer mezclas. Posteriormente se evaluó el efecto antagónico de las mezclas seleccionadas en semilla de alfalfa inoculada con S. enterica y E. coli O157, y se monitoreo el comportamiento de los patógenos a lo largo de la germinación. Se obtuvieron cuatro cepas antagonistas identificadas como Bacillus sp. Las cepas 9, 18, 21 y 51 con efecto contra S. enterica y las cepas 19 y 51 contra E. coli O157. Se establecieron tres mezclas: mezcla 2 (21 y 18), mezcla 3 (18 y 51) y mezcla 4 (21 y 51). Las mezclas 2 y 4 inhibieron a S. enterica y la mezcla 3 a E. coli O157. Cuando estas mezclas se aplicaron en H2O purificada estéril en donde se colocó a remojar la semilla inoculada con los patógenos durante 4 horas, la reducción fue de aproximadamente 1.6 y 2.5 Log UFC/g para S. enterica y E. coli, respectivamente. Durante seis días de germinación, se logró controlar el desarrollo de los patógenos. Estas mezclas antagonistas no afectaron el índice de germinación de la semilla de alfalfa. Se detectó la producción de sideróforos y de ácido cianhídrico por parte de las bacterias antagonistas. Estos resultados sugieren que los metabolitos secundarios podrían ser útiles para el control de patógenos humanos, sin embargo estudios adicionales son necesarios para el mejoramiento de la seguridad microbiana en los germinados de alfalfa.Alfalfa sprouts in recent years have become very important in the population due to its nutritional properties. However, alfalfa sprouts have been implicated in disease outbreaks caused by Salmonella enterica and Escherichia coli O157, probably because they are frequently eaten raw without applying a treatment disinfection prior to ensure the elimination of pathogenic microorganisms, or treatments applied are not effective. The use of antagonistic microorganisms has been successfully used in the control of phytopathogenic microorganisms, however few is the information regarding their application on human pathogenic microorganisms. The aim of this work was to evaluate the antagonistic effect of microorganisms isolated from various sources against S. enterica and E. coli O157 during germination of alfalfa seeds. In vitro, antagonistic effect was evaluated in 32 strains isolated from different sources (cheese, cauliflower, beets, amaranth seeds, baby feces and organic farmland) against S. enterica and E. coli O157. Strains with antagonistic effect against pathogens were selected and determined whether there was antagonism between them in order to establish mixtures. Subsequently, the antagonist effect of the mixtures selected was evaluated in alfalfa seed inoculated with S. enterica and E. coli O157, and was monitored the behavior of pathogens throughout germination. Four antagonistic strains were obtained and identified as Bacillus sp., strains 9, 18, 21 and 51 against S. enterica and strains 19 and 51 against E. coli O157. Three mixtures were established: Mix 2 (21 and 18), Mix 3 (18 and 51) and Mix 4 (21 and 51). Mix 2 and 4 inhibited S. enterica and the mixture 3 to E. coli O157. When these mixtures were applied in sterile purified water in which was placed the seed soak previously inoculated with a cocktail of S. enterica and a strain of E. coli O157 led to a reduction of 1.6 and 2.5 log CFU/g, respectively. They managed to control the development of the pathogens over six days of germination. These antagonistic mixtures did not affect the germination rate of alfalfa seed. It was detected siderophore production and hydrocyanic acid by the antagonistic bacteria. These results suggest that secondary metabolites can be useful for the control of humans pathogens, perhaps further studies are needed to further improve sprout safety.