Título :	Identificación y caracterización de proteasas del músculo de pez león (Pterois sp.)
Sustentante:	Sara Elisa Vega Hernández
Palabras clave :	Biología y Química Ciencias de la Vida Otras Especialidades de la Biología
Fecha de publicación :	20-sep-2022
Editorial :	Ciencias Naturales
metadata.dc.degree.department:	Facultad de Ciencias Naturales
metadata.dc.degree.name:	Licenciatura en Biología
Descripción :	El pez león Pterois sp. es un predador de talla mediana en los arrecifes de Coral del Indo Pacífico que pertenece a la familia Scorpaenidae. Dentro de dicha familia se encuentran varios de los peces más venenosos y vistosos por su patrón de coloración y modificación en las aletas. Son organismos que utilizan veneno como mecanismo de defensa (contenido principalmente en las aletas dorsales). El veneno del pez león es uno de los venenos más efectivos y tóxicos que se han descrito en peces. Se considera una especie invasora debido a su introducción y al impacto en la estructura de la comunidad y biodiversidad de peces nativos de los ecosistemas coralinos del Caribe, reduciendo el reclutamiento, densidad, la biomasa y la diversidad genética, causando, además, grandes afectaciones económicas. Desde el primer registro de dicha especie en Florida en 1992 se ha expandido rápidamente a lo largo del Caribe y se proyecta invadirá el Pacífico Oriental a través del Canal de Panamá. Por lo tanto, el objetivo de este estudio es identificar y caracterizar la actividad de las proteasas presentes en el músculo de Pterois sp. para su posterior aprovechamiento como herramienta biotecnología; e indirectamente, complementar las medidas de extracción que se tienen para el control de esta especie. Actualmente, los estudios bioquímicos de Pterois sp. se han enfocado únicamente en la caracterización del veneno. Para este trabajo, se emplearon 3 organismos colectados en el Caribe Mexicano a 6 y 10 m de profundidad. Se aisló el músculo de cada organismo y se maceraron con un amortiguador de fosfatos de sodio 20 mM, pH 7, a 4 °C para la obtención de un extracto crudo proteolítico. Posteriormente, se analizó el perfil proteico del extracto crudo por Cromatografía Líquida de Alta Resolución en Fase Reversa (RP-HPLC), Electroforesis en Geles de Poliacrilamida con Dodecil Sulfato de Sodio (SDS-PAGE) y Electroforesis en condiciones nativas (Native-PAGE). La actividad proteolítica se determinó a diferentes valores de pH (de 2 a 12) utilizando como sustratos caseína 1% y hemoglobina 1%, y en un rango de temperatura de 4 a 60 °C, con un tiempo de reacción de 15 minutos. La cuantificación de la proteólisis se realizó por espectrofotometría a 280 nm. Además, se realizaron ensayos de actividad proteolítica con inhibidores específicos para metalo y serín proteasas (EDTA y PMSF, respectivamente). Se determinó una mayor actividad proteolítica a pH 6.6 y 7.0, y una temperatura óptima de 25 °C, con actividades específicas de 169.40 ± 4.8 U/mg y 172.60 ± 2.07 U/mg, respetivamente, sin tener una diferencia estadísticamente significativa entre dichos valores de pH. En los ensayos con inhibidores se reportó actividad residual de 54.2 ± 1.28 % con PMSF (pH 6.6, 25 ºC), mientras que con EDTA no se observó un efecto significativo, lo que indica la presencia predominante de serín proteasas en el extracto crudo. En el perfil electroforético, se observaron proteínas con pesos moleculares estimados en un rango de 7.1 a 274.0 kDa. Adicionalmente, se fraccionó el extracto crudo por RP-HPLC obteniéndose 7 fracciones; la fracción número 6 fue aislada y presentó actividad específica de 1557.04 ± 292.19 U/mg en las condiciones óptimas determinadas (pH 6.6, 25 ºC), con un peso molecular estimado de 18.1 kDa. El factor de purificación fue de ~9.9 lo que indica un aceptable grado de purificación de la fracción obtenida. Estas características, pueden delimitar la potencial aplicación biotecnológica del extracto proteolítico, aunque es necesario realizar más estudios para su aprovechamiento.
URI :	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/8702
Aparece en las colecciones:	Licenciatura en Biología

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