Título :	Inmovilización de la enzima urato oxidasa para desarrollo de un Biosensor de Ácido Úrico
Autor(es):	Bryan Modesto Landeros Alamilla
Palabras clave:	Biología y Química Química Química analítica
Fecha de publicación :	16-ene-2023
Editorial :	Ingeniería
Facultad:	Facultad de Ingeniería
Programa académico:	Ingeniería en Nanotecnología
Resumen:	El ácido úrico está relacionado de forma directa e indirectamente con diversas enfermedades, principalmente con la hiperuricemia. En la actualidad, existen métodos de cuantificación para la detección de ácido úrico, sin embargo, estos métodos enfrentan complicaciones como la cantidad de muestra que se necesita y el tiempo para la obtención de los resultados. En el presente trabajo se desarrolló y se realizó la optimización de un biosensor enzimático para la detección de ácido úrico. El biosensor se compone de 3 electrodos, el electrodo de trabajo de papel Toray, electrodo de referencia comercial de Ag/AgCl y contraelectrodo de grafito. La enzima urato oxidasa se inmovilizó a través del método cross-linking, usando como agente de atrapamiento glutaraldehído al 5% y diferentes tipos de materiales de carbón nanoestructurados, los cuales permitieron potenciar la detección de ácido úrico. Los materiales nanoestructurados fueron nanotubos de carbón de pared múltiple carboxilados, nanotubos de carbón de pared múltiple sin funcionalizar y nanofibras de carbón, seleccionando las nanofibras debido a los resultados obtenidos de las pruebas electroquímicas, voltamperometrías cíclicas y cronoamperometrías. En segundo lugar, se optimizaron las concentraciones de enzima y de nanofibras de carbón, obteniendo una concentración ideal de enzima de 10 mg mL-1 y de CNF 5 mg mL-1. El límite de detección fue de 0.92 μM, límite de cuantificación de 3.49 μM, la constante de Michaelis Menten de 12.64 μM y un rango lineal de 0-1600 μM. Posteriormente, se realizó la evaluación del electrodo de trabajo con diferentes valores de pH, simulando los valores encontrados en fluidos biológicos como sangre, sudor y orina. Esto con la finalidad de observar el comportamiento del biosensor. Las soluciones fueron: buffer Tris-HCl pH 8.8, buffer de fosfato 7.4, buffer de fosfato 5.7 y buffer de acetato 4.5. Los resultados obtenidos fueron similares, sin embargo, se presentó un menor rango lineal en medios ácidos. Las pruebas de interferentes se realizaron en buffer de fosfato 7.4, esto debido a que las evaluaciones finales se planearon realizar en suero. Los interferentes utilizados fueron: glucosa, ácido ascórbico, urea y ácido láctico, ninguno presentó un porcentaje de interferencia mayor al 10 %. Finalmente, el biosensor fue probado con muestras reales. Se extrajo el suero de sangre de dos voluntarios y se llevó a cabo el análisis de las muestras. La evaluación del voluntario 1 mostró una concentración de ácido úrico en suero de 236 μM, mientras el voluntario 2 mostró una concentración de ácido úrico en suero de 456.69 μM.
URI:	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/7898
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