Título :	Validación de un método de diagnóstico basado en el ensayo isotérmico mediado por horquillas (LAMP) de Rickettsia rickettsii en garrapatas y humanos infectados
Autor(es):	Aída Olguín Barrera
Palabras clave:	LAMP Rickettsia rickettsii Validación
Área:	MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD
Fecha de publicación :	1-jun-2021
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Maestría en Salud y Producción Animal Sustentable
Resumen:	Rickettsia rickettsii es el agente causal de La Fiebre Manchada de las Montañas Rocosas. Esta enfermedad es de curso agudo y presenta alta tasa de mortalidad. Se caracteriza por tener signos y síntomas inespecíficos en su etapa inicial, por cual el diagnóstico se dificulta. A la fecha se han desarrollado numerosas técnicas de diagnóstico para esta enfermedad, sin embargo, no son altamente sensibles, ni específicas, ya que generan reacción cruzada con otras enfermedades rickettsiales. La técnica se desarrolló de LAMP para Rickettsia rickettsii, la cual ha sido probada en laboratorio y se han estimado sus características analíticas de sensibilidad, especificidad y repetibilidad. La sensibilidad que presenta es de 0.003 ng; la especificidad, se realizó con ADN de 11 especies diferentes de rickettsias, además de E. cannis, B. burgdorferi, A. phagocytophilum, así mismo con DNA de humano, de perro y de garrapata R. sanguineous, amplificando únicamente la muestra con DNA de R. rickettsii. El objetivo del presente trabajo fue validar la técnica de LAMP para Rickettsia rickettsii en muestras de campo de garrapatas y humanos infectados, determinando la sensibilidad y la especificidad diagnóstica, además de la reproducibilidad de la técnica. También, se tuvo como objetivo transferirla a laboratorios de diagnóstico en Salud Humana y Salud Animal. Para determinar la especificidad y sensibilidad diagnóstica se obtuvieron un total de 103 muestras: 77 muestras de DNA de sangre de humanos de la Unidad de Investigación de Enfermedades Infecciosas del Centro Médico Nacional Siglo XXI, IMSS (Ciudad de México); 30 muestras de garrapatas y 26 de sangre de humanos del Instituto de Investigaciones de Ciencias Veterinarias de la Universidad Autónoma de Baja California (Baja California). Posteriormente, las muestras se evaluaron con la técnica de LAMP, la cual fue realizada en los laboratorios de estas dos Instituciones, mediante una prueba en ciego. Se siguió el mismo protocolo, y se realizó con los mismos reactivos y controles, y los resultados obtenidos se compararon con los resultados de la técnica de PCR (prueba de oro). Los resultados obtenidos en las características de rendimiento diagnóstico para las muestras clínicas de humanos fueron una sensibilidad para LAMP colorimétrico con azul de Hodroxinaftol (HNB) del 93% (IC 95% 77.9 – 99.2), una especificidad del 70% (IC 95% 58.62 – 80.03) y un k de 0.53 (IC 95% 0.35 – 0.70), para electroforesis la sensibilidad fue del 97% (IC 95% 82.7 – 99.9) con una especificidad del 58% (IC 95% 45.4 - 69) y un k de 0.42 (IC 95% 0.26 – 0.58). Para muestras de garrapatas se obtuvo una sensibilidad de 80% (IC 95% 51.9 – 95.67), una especificidad de 93% (IC 95%68 – 99.83) para HNB y para electroforesis la sensibilidad y especificidad fue de 87% (IC 95% 59.5 – 98.3). El k para ambas fue de 0.73 (IC 95% 0.38 - 1). También se estimó la concordancia entre HNB y electroforesis, presentan una muy buna concordancia del 0.82 (IC 95% 0.63 – 1) en el caso de humanos y el caso de garrapatas fue de 0.87 (IC 95% 0.51 - 1). Se concluye que, la técnica de LAMP para R. rickettsii demuestra que es una técnica reproducible en tres regiones distintas del país (Querétaro, Ciudad de México y Baja California) bajo condiciones similares en laboratorios con diferente infraestructura, además, el resultado se obtiene en menor tiempo en comparación con un programa de PCR y se interpreta visualmente mediante cambio de color.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/2682
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