Título :	Evaluación de los factores promotores de resucitación como impulsores del crecimiento de Mycobacterium bovis en cultivos
Autor(es):	Yesenia Guadalupe Contreras Magallanes
Palabras clave:	Tuberculosis bovina Mycobacterium bovis dormancia bacteriana reactivación bacteriana proteínas recombinantes: RipA, RpfB Bovine tuberculosis Mycobacterium bovis bacterial dormancy bacterial reactivation recombinant proteins: RipA, RpfB
Área:	BIOLOGÍA Y QUÍMICA
Fecha de publicación :	nov-2017
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Maestría en Salud y Producción Animal Sustentable
Resumen:	En este trabajo se evaluó el efecto de las proteínas recombinantes RipA y RpfB sobre el crecimiento de bacterias dormantes y activas de Mycobacterium bovis AN5. Se emplearon cuatro concentraciones de proteína total: 15, 30, 60 y 120 µg, para RipA y RpfB, y una combinación RipA + RpfB; en medios Middlebrook 7H9 y7H10. Como control positivo se utilizó filtrado de cultivo de Mycobacterium bovis (F.C. 120 µg) y un control negativo (sin proteína). Para hacer la reactivación, las bacterias fueron previamente inducidas a dormancia poniéndolas cuatro meses en medio mínimo Sauton, donde se les privó de nutrientes y oxígeno. Para confirmar el estado en que se encontraban las bacterias, el cultivo se evaluó cada 15 días para medir la densidad óptica (D.O. 600nm), también por conteo de bacterias totales en cámara de Neubauer y conteo de UFC en medio sólido. Posteriormente se adicionaron las proteínas en los medios sólidos y líquidos con bacterias dormantes o activas. En los medios sólidos se evaluó la capacidad de formar colonias con y sin proteína. En los medios líquidos se tomaron lecturas de la D.O. cada tres días durante 12 días y a este día se realizó el conteo en Neubauer. Para determinar diferencia significativa entre los tratamientos se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas (P <0.05) con la utilización de RipA en bacterias activas en la formación de colonias en medio sólido. Para la combinación RipA + RpfB no se observó diferencia estadística (P >0.05); sin embargo, se observó formación de colonias a partir de los dos días de cultivo. Para los medios líquidos, se encontraron diferencias estadísticas significativas (P <0.05) en la evaluación de D.O. para la adición de RipA en bacterias dormantes y activas, RpfB en bacterias dormantes y RipA + RpfB en bacterias dormantes; en el conteo con la cámara de Neubauer se encontraron diferencias estadísticas significativas (P <0.05) para RipA, RpfB y RipA + RpfB. Por lo que se puede concluir que ambas proteínas promueven el crecimiento de M. bovis en estado activo o dormante, siendo mejor el efecto al usarlas en conjunto. In this work, the activity of RipA and RpfB recombinant proteins were evaluated in dormant and active Mycobacterium bovis AN5 bacteria. Four concentrations of total protein were used 15, 30, 60 and 120 μg for RipA and RpfB, and a combination of both; cultures were done in quadruplicate in Middlebrook 7H9 broth with OADC enrichment and 20% Tween 80 and Middlebrook 7H10 agar with OADC enrichment. Also, as a positive control a culture filtrate of Mycobacterium bovis (F.C. 120 μg) and a negative control (without protein), were used, for dormant and for active bacteria. Before reactivation of the dormant bacteria, they were induced to dormancy for four months in Sauton minimal medium, where they were deprived of nutrients and oxygen. Dormant state was evaluated every 15 days defining optical density (O.D. 600nm) measurements, counting in Neubauer chamber and CFU counting on 7H10 media. Then proteins were added to the solid and liquid media with dormant or active bacteria. In the 7H10 media the ability to form colonies with and without protein was evaluated in 7H9 media. The OD was evaluated every three days for 12 days, and at this day bacteria were counted in Neubauer chamber. The Kruskal-Wallis test was used to determine significant difference between groups. Significant difference (P <0.05) was observed in CFU when using RipA in active bacteria. When using RipA + RpfB no statistical difference was found (P >0.05), however, formation of colonies at two days of culturing was observed. Statistical difference (P <0.05) was observed in the evaluation of OD in 7H9 media for the use of RipA in dormant and active, as well as for RpfB in dormant bacteria and RipA + RpfB in dormant bacteria. The same was observed for the Neubauer chamber counts (P <0.05) for RipA, RpfB and RipA + RpfB treatments.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1155
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