Título :	Efecto de los anticuerpos contra la proteína canal-aniónico dependiente de voltaje (VDAC) en el proceso de infección de Babesia bigemina en Rhipicephalus microplus
Autor(es):	Reyna Idaly Ortega Sanchez
Palabras clave:	Babesia bigemina BmVDAC Rhipicephalus microplus inmunización bloqueo de transmisión
Área:	CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA
Fecha de publicación :	6-dic-2018
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Maestría en Salud y Producción Animal Sustentable
Resumen:	Babesia bigemina es un protozoario intraeritrocítico que causa anemia hemolítica en bovinos y es uno de los agentes causales de la babesiosis bovina en México, causa pérdidas económicas debido a la baja en la producción de leche y carne, además de la muerte de animales que no son tratados a tiempo. En México la garrapata del ganado Rhipicephalus microplus es vector de enfermedades como la babesiosis y la anaplasmosis bovina que afectan al ganado bovino, ocasionando pérdidas económicas a causa de la baja en la producción y por gastos asociados al tratamiento con acaricidas. El uso continuo de acaricidas como principal método de control ha ocasionado que las garrapatas generen resistencia, además de dejar residuos químicos en los productos pecuarios y el medio ambiente, lo que ocasiona preocupación en la sociedad. Un método de control no químico en el uso de vacunas, pero actualmente no se cuenta con vacunas comerciales efectivas para el control de infestaciones por garrapatas en el ganado. La proteína canal-aniónico dependiente de voltaje (BmVDAC) fue identificada en el 2013 en garrapatas de la especie Rhipicephalus microplus. BmVDAC se sobreexpresa en células del intestino de garrapatas que se alimentan con sangre de bovino infectada con Babesia bigemina. El propósito de este trabajo es evaluar la eficacia de los anticuerpos contra BmVDAC en la actividad de bloqueo de infección de Babesia bigemina en Rhipicephalus microplus y su capacidad inmunoprotectora contra las garrapatas. Para esto, bovinos provenientes de zona libre de babesiosis bovina y garrapata del ganado; se dividieron en tres grupos de cinco animales cada uno: el grupo uno fue inmunizado con adyuvante, el grupo dos y tres fueron inmunizados, con 100 μg de VDAC recombinante (rBmVDAC) resuspendida en adyuvante. Después de la tercera inmunización se determinó la producción de anticuerpos contra rBmVDAC usando la técnica de ELISA indirecta, utilizando diluciones de los sueros bovinos de 1:100 y 1:500 y los resultados se evaluaron por medio de una prueba de ANOVA con una significancia del 95%, se encontró el valor de p=0.000. Posteriormente los bovinos de los tres grupos fueron infestados con larvas Rhipicephalus microplus y los grupos uno y dos fueron infectados con Babesia bigemina. Se evaluó el efecto de los anticuerpos contra la proteína rBmVDAC por medio de la determinación de supervivencia, peso, ovoposición y fertilidad de huevos utilizando una análisis estadístico de ANOVA con un valor de significancia del 95% y con el uso de fórmulas para determinar la eficacia de la inmunización. Los resultados del análisis de ANOVA fueron los siguientes: número de garrapatas p=0.000, peso de garrapatas: p=0.020 y peso de huevos p=0.058. En el grupo 1 se encontró una eficiencia de inmunización de 23% y en el grupo 3 se encontró una eficiencia de 88%. La infección de Babesia bigemina en el grupo 1 y grupo 2 se determinó por medio de qRT-PCR de muestras de garrapatas repletas de cada uno de los grupos por medio de la amplificación de gapdh de B. Bigemina y esterasa de R. microplus, se utilizó el método Ct para la normalización de los datos y posteriormente se evaluaron los resultados por medio del análisis estadístico de ANOVA con una significancia del 95% y se encontró un valor de p=0.326. Babesia bigemina is an intraerythrocytic protozoon that causes hemolytic anemia in cattle and is one of the causal agents of bovine babesiosis in Mexico, causes economic losses due to the decrease in the production of milk and meat, in addition to the death of animals that are not treated on time. In Mexico, the cattle tick Rhipicephalus microplus is a vector of diseases such as babesiosis and bovine anaplasmosis that affect cattle, causing economic losses due to the decrease in production and costs associated with treatment with acaricides. The continued use of acaricides as the main control method has caused ticks to generate resistance, in addition to leaving chemical residues in livestock products and the environment, which causes concern in society. A method of non-chemical control in the use of vaccines, but currently there are no effective commercial vaccines for the control of tick infestations in cattle. The voltage dependent channel-anionic protein (BmVDAC) was identified in 2013 in ticks of the species Rhipicephalus microplus. BmVDAC is overexpressed in cells of the intestine of ticks that feed on bovine blood infected with Babesia bigemina. The purpose of this work is to evaluate the efficacy of antibodies against BmVDAC in the blocking activity of Babesia bigemina infection in Rhipicephalus microplus and its immunoprotective capacity against ticks. For this, cattle coming from cattle-free bovine babesiosis and tick-free zone; were divided into three groups of five animals each: group one was immunized with adjuvant, group two and three were immunized, with 100 μg of recombinant VDAC (rBmVDAC) resuspended in adjuvant. After the third immunization, the production of antibodies against rBmVDAC was determined using the indirect ELISA technique, using dilutions of bovine sera of 1: 100 and 1: 500 and the results were evaluated by means of an ANOVA test with a significance of 95%, the value of p = 0.000 was found. Subsequently the cattle of the three groups were infested with larvae Rhipicephalus microplus and groups one and two were infected with Babesia bigemina. The effect of the antibodies against the rBmVDAC protein was evaluated by means of the determination of survival, weight, oviposition and fertility of eggs using a standard ANOVA analysis with a significance value of 95% and with the use of formulas to determine the efficacy of immunization. The results of the ANOVA analysis were the following: number of ticks p = 0.000, weight of ticks: p = 0.020 and weight of eggs p = 0.058. In group 1 an immunization efficiency of 23% was found and in group 3 an efficiency of 88% was found. The infection of Babesia bigemina in group 1 and group 2 was determined by means of qRT-PCR of samples of ticks filled with each of the groups by means of the amplification of gapdh of B. bigemina and esterase of R. microplus, use the Ct method for the normalization of the data and later the results were evaluated by means of the statistical analysis of ANOVA with a significance of 95% and a value of p = 0.326 was found.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1021
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