Título :	Efecto dosis respuesta de la fracción concentrada en lectinas (FCL) de frijol Tépari (Phaseolus acutifolius) en la movilización de calcio citoplasmático en líneas celulares de mama
Autor(es):	Andrea Diaz Betancourt
Palabras clave:	Lectinas frijol Tépari calcio citoplasmático especies reactivas de oxígeno
Área:	MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD
Fecha de publicación :	22-nov-2018
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Maestría en Ciencias de la Nutrición Humana
Resumen:	El calcio citoplasmático ([Ca2+]i) provoca la activación de señales intracelulares por cambios pequeños en su concentración. El incremento no controlado de éste puede activar señales de duplicación y muerte celular. Por otra parte, se ha visto que algunas lectinas presentan propiedades anticancerígenas y efectos diferenciales dependientes de la concentración. En nuestro grupo de trabajo, se ha reportado que la fracción concentrada en lectinas (FCL) provoca la muerte celular a las 4 h. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la FCL sobre líneas celulares de mama transformadas MCF-7 y no transformadas MCF-12 a través de mediciones de dinámica de calcio y viabilidad celular a corto plazo. La obtención de la FCL dio un rendimiento de 300 mg/kg de frijol Tépari. Se utilizó el fluorocromo Fluo 4AM a concentración 5 μM para marcar el calcio citoplasmático libre en las células y medir dinámica de calcio en tiempo real por 6 min. Mediante este método se capturó 1 imagen/segundo (1 frame/sec) y graficó el cambio de Unidades de Fluorescencia Arbitraria (UFA’s) en función del tiempo. La FCL movilizó [Ca2+]i y resultó un efecto de respuesta y tiempos de activación dosis dependiente en MCF-12 desde la concentración 0.108 μg/mL. Las MCF-7 sólo registraron movilización de [Ca2+]i a 27.85 μg/mL. Este experimento se reprodujo en condiciones cero Ca2+ (0 Ca2+) extracelular en MCF-12 para determinar el origen del Ca2+ liberado durante el tratamiento; el resultado fue un retardo en la respuesta y un decremento en las UFA’s, suponiendo una liberación de Ca2+ de reservorios intracelulares. En el ensayo de viabilidad celular por oxido-reducción como un indicador de salud celular, se realizaron mediciones intermitentes desde los 10 min hasta 72 h, resultando en un mayor porcentaje de inhibición en MCF-12 a altas concentraciones y antes de las 24 h, mientras que MCF-7 tuvieron una inhibición más sostenida y homogénea de todas las concentraciones desde 24 h a 72 h. Los resultados sugieren que a corto plazo MCF-12 es más sensible a la FCL con respecto a MCF-7, y que los mecanismos ON (aumento de [Ca2+]i) homeostasis de calcio son diferentes en ambas líneas, haciendo a la línea transformada MCF-7 más resistente a largo plazo. Cytoplasmic calcium ([Ca2+]i) causes the activation of intracellular signals by small changes in its concentration. The uncontrolled increase of Ca2+ can activate signals of duplication and cell death. On the other hand, it has been seen that some lectins have anticancer properties and dependent differential effects on concentration. In our work group, it has been reported that a concentrated fraction Tepary bean lectin (FCL) causes cell death at 4 h. The objective of this work was to evaluate the effect of FCL on transformed MCF-7 and non-transformed MCF-12 breast cell lines through the measurement of short-term calcium dynamics and cell viability. Obtaining of FCL gave a yield of 300 mg/kg of Tepary bean. The Fluo 4AM fluorochrome at a concentration of 5 μM was used to label the free cytoplasmic calcium of the cells and to measure calcium dynamics in real time for 6 min. By this method was captured 1 image/second (1 frame/sec) and graphed the change of Arbitrary Fluorescence Units (UFA's) versus time. The FCL mobilized [Ca2+]i and resulted in a response effect and activation times dose-dependent in MCF-12 since 0.108 μg/mL concentration. The MCF-7 only show mobilization of [Ca2+]i at 27.85 μg/mL concentration. This experiment was reproduced under conditions of extracellular zero Ca2+ (0 Ca2+) in MCF-12 to determine the origin of Ca2+ released during the treatment; the result was a delayed response and a decrease in UFAs, assuming a Ca2+ release from intracellular reservoirs. In cell viability assay by oxidation-reduction as an indicator of cellular health, intermittent measurements were made from 10 min to 72 h, resulting in a higher percentage of inhibition in MCF-12 at high concentrations and before 24 h , whereas MCF-7 had a more sustained and homogeneous inhibition in all concentrations from 24 h to 72 h. The results suggest that in short term, MCF-12 is more sensitive to FCL respect to MCF-7, and that ON mechanisms (increase [Ca2+]i) and calcium homeostasis are different in both lines, making the transformed line MCF-7 more resistant to long term.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1011
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