Título :	Implementación del gen arg2 como marcador de selección en Trichoderma atroviride
Sustentante:	Omar Nieves Ugalde
Palabras clave :	Biología y Química Ciencias Médicas Biología Vegetal (Botánica)
Fecha de publicación :	1-ene-2021
Editorial :	Universidad Autónoma de Querétaro
metadata.dc.degree.department:	Facultad de Ciencias Naturales
metadata.dc.degree.name:	Licenciatura en Biología
Descripción :	Trichoderma atroviride es un hongo filamentoso, comúnmente encontrado en el suelo, que presenta una alta actividad antagónica y un estilo de vida micoparasítico contra hongos patógenos de plantas (Herrera-Estrella y Chet, 1998). Además, posee una alta capacidad productora de enzimas y metabolitos de importancia biotecnológica. Actualmente, se han secuenciado al menos cinco especies de Trichoderma y sus códigos se encuentran en base datos públicos. Sin embargo, la genómica funcional en estos hongos se encuentra limitado principalmente al uso del marcador de selección hph que confiere resistencia al antibiótico higromicina B. Adicionalmente la generación de mutantes auxótrofas ha resultado un método eficiente, seguro y barato. En este trabajo se exploró la posibilidad de generar mutantes auxótrofas a arginina e implementar el gen arg2 como un marcador seleccionable en T. atroviride, mediante reemplazo génico, usando secuencias homologas que flanquean el marcador de selección hph, se generaron mutantes auxótrofas a arginina mediante la eliminación del gen arg2, que codifica la subunidad pequeña de la carbamoil fosfato sintetasa (CFS), la cual cataliza la producción de carbamoil fosfato que es un substrato para la biosíntesis de citrulina, y, este a su vez, es un intermediario en la síntesis de arginina. La arginina es un aminoácido esencial para la formación de proteínas y nucleótidos, por lo cual una mutante auxótrofa a arginina (Δarg2) será incapaz de desarrollarse al menos que el medio de cultivo sea enriquecido con este aminoácido. Después de seleccionar los transformantes durante tres cultivos monospóricos, las mutantes fueron identificadas mediante pruebas de auxotrofía e identificadas molecularmente mediante pruebas de PCR. Posteriormente, se determinó que 50mM de L- arginina restaura el crecimiento, la reproducción asexual inducida por la luz y al daño mecánico a un nivel comparable a la cepa silvestre. Finalmente, 600 pares de bases rio arriba y rio debajo de la región codificante del gen arg2 es el tamaño mínimo suficiente para complementar las mutantes auxótrofas a arginina.
URI :	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/10047
Aparece en las colecciones:	Licenciatura en Biología

Los ítems de DSpace están protegidos por copyright, con todos los derechos reservados, a menos que se indique lo contrario.