A lo largo de los años, el sector agrícola ha buscado alternativas para mejorar los métodos tradicionales de propagación, la multiplicación acelerada de nuevas especies y el mejoramiento genético a través de la biotecnología del cultivo in vitro. Sin embargo, el uso del gelificante Agar ha aumentado y dificultado la expansión de esta biotecnología debido a su alto costo y demanda, la cual que ha llegado afectar su ecosistema. En consecuencia, las investigaciones se han enfocado en buscar sustitutos parciales o totales que se encuentren de forma natural y que sean de fácil extracción. Por ello, en este proyecto se presenta el uso de hidrocoloides de pectina y mucílago de dos especies de nopal (O. ficus-indica y O. robusta) que fueron estudiados como agentes gelificantes en medios de cultivo in vitro. Estos hidrocoloides fueron obtenidos mediante una hidrólisis alcalina y estudiados por FTIR para su caracterización química. Posteriormente, estos fueron utilizados en proporciones de 0.8%, 0.6%, 0.4% y 0.2% en combinación con Agar para estudiar el tiempo de gelificación, color, textura (TPA), germinación de semillas bajo luz y condiciones de oscuridad, y un estudió enológico del cultivo de Orchidea cattleya, incluyendo los análisis de hojas y raíces, largo de raíces y hojas, altura de plántula y ancho del tratamiento mejor diseñado. Nuestros resultados demuestran que el tratamiento compuesto por 0.4% de pectina de O. ficus-indica y 0.4% de Agar mejora el tiempo de germinación, el crecimiento de las plantas, el número de hojas y raíces, resultando un bioestimulante para el cultivo in vitro de Orchidea cattleya. Si bien los hidrocoloides presentados en el nopal no funcionaron como sustitutos totales del Agar, son una alternativa natural y de fácil extracción que puede ser utilizada en la industria biotecnológica para cultivo in vitro.