Título :	Estandarización de la técnica de fraccionamiento celular para el estudio de BmVDAC en células de intestino de R. microplus a distintos tiempos post repleción
Autor(es):	Mario Gahel Montiel González
Palabras clave:	Biología y Química Ciencias Agrarias
Fecha de publicación :	1-feb-2023
Editorial :	Ciencias Naturales
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Licenciatura en Microbiología
Resumen:	BmVDAC es una proteína de Rhipicephalus microplus que se ha demostrado se sobreexpresa y relocaliza en células de intestino de las garrapatas infectadas con Babesia bigemina a diferentes tiempos post repleción, además en experimentos de vacunación de bovinos infectados y no infectados con el parásito, se evidenció un alto porcentaje de protección fundamentalmente en la fertilidad de las garrapatas colectadas de los animales vacunados, sin embargo no se conoce la función que podría estar jugando esta proteína durante la infección de B. bigemina. Uno de los aspectos importantes para profundizar y conocer la función de cualquier proteína es estudiar donde se localiza, en humanos VDAC que es una proteína mitocondrial también se ha localizado en la membrana plasmática. El objetivo del presente trabajo fue la estandarización de la técnica de fraccionamiento celular a partir de intestinos de R. microplus, para el estudio de la localización de la proteína BmVDAC durante la infección con B. bigemina a distintos tiempos post repleción. Las condiciones de la estandarización de la extracción de fracciones fue la ruptura celular, lavados entre la extracción de fracciones y anticuerpos específicos como marcadores de fracciones, fueron establecidas usando extractos de membrana de garrapatas colectadas en el campo. Una vez establecidas las condiciones, se colectaron garrapatas de bovinos infectados y no infectados con B. bigemina y se extrajeron los intestinos a las 0, 24 y 72 horas post repleción. Una parte de los intestinos se usó para realizar un cultivo primario para la inmunolocalización por microscopía confocal y a la otra parte se les hizo la extracción y análisis de fracciones celulares. Las diferentes fracciones fueron analizadas en geles SDS-PAGE al 10%, transferidas a membranas de nitrocelulosa y reveladas con anticuerpos anti-BmVDAC y anti-Bm86 como marcador de membrana. Los resultados de esta investigación sugieren que la proteína BmVDAC se encuentra únicamente en la fracción membranal, aunque una de las limitaciones del fraccionamiento realizado es que la fracción membranal incluye tanto la membrana citoplasmática como mitocondrial, por ello es necesario determinar si la proteína BmVDAC se relocaliza a la membrana citoplasmática en consecuencia de la infección por B. bigemina con ensayos de microscopía confocal. Este proyecto se realizó durante la pandemia de Covid- 19, lo que complico e hizo imposible realizar la inmunolocalización de BmVDAC mediante microscopia por la limitación en disposición de las instalaciones y los
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/4405
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