Título :	Identificación y caracterización inmunológica de epítopos de proteínas involucradas en la invasión de B. bovis a los eritrocitos
Autor(es):	Mario Hidalgo Ruiz
Palabras clave:	Babesiosis bovina Babesia bovis Péptidos Inhibición de la invasión Anticuerpos neutralizantes Bovine babesiosis Babesia bovis Peptides Invasion inhibition Neutralizing antibodies
Área:	BIOLOGÍA Y QUÍMICA
Fecha de publicación :	21-ene-2019
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Doctorado en Ciencias Biológicas
Resumen:	Babesia bovis, es un protozoario del filo Apicomplexa y agente causal de la babesiosis bovina, la enfermedad económicamente más importante transmitida por artrópodos. El proceso de invasión de B. bovis a los eritrocitos de bovino se caracteriza por cuatro etapas: 1) Anclaje inicial del parásito a los eritrocitos, 2) Reorientación del merozoíto, 3) Unión estrecha o unión en movimiento y finaliza con la 4) Internalización del parasito dentro del eritrocito; algunas proteínas identificadas y caracterizadas en diferentes parásitos del filo Apicomplexa tienen funciones involucradas en este proceso y son consideradas como antígenos vacunales. Sin embargo, los epítopos B de estas proteínas que generan una inmunidad neutralizante aún no han sido identificados y caracterizados en B. bovis. Por lo tanto, en este estudio mediante análisis bioinformático se identificaron péptidos conservados que contienen epítopos B de las proteínas AMA-1, RAP-1, MSA-2c, RON2 y MIC-1. Estos péptidos fueron sintetizados en un sistema peptídico multi-antigénico de ocho brazos (MAPS-8) e inmunizados en cuatro ocasiones en dos bovinos por cada péptido. Se colectaron muestras de suero pre y post-inmunización que se evaluaron mediante ELISA, los péptidos P1-AMA1 y P1-MSA2c no generaron una respuesta inmune mostrando un resultado negativo en el ELISA. Los demás péptidos mostraron títulos de 1:2000 en ambos bovinos inmunizados, excepto los péptidos P2-AMA1, P2-RAP1 y P3-RAP1. Aunque todos estos sueros de bovinos fueron capaces de reconocer fases intraeritrocíticas mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI), solo 9 de 23 fueron capaces de inhibir el proceso de invasión en ensayos de neutralización in vitro. Algunos de estos péptidos también fueron reconocidos por sueros de animales naturalmente infectados. Estos resultados demuestran que no todos los epítopos B de estas proteínas confieren una inmunidad humoral neutralizante, por lo que esta caracterización inmunológica permitió identificar los péptidos que generan una respuesta inmune en bovinos con presencia de anticuerpos neutralizantes que bloquean el proceso de invasión, haciendo de estos péptidos potenciales candidatos vacunales. Babesia bovis is a protozoan parasite from the filo Apicomplexa and is the causative agent of bovine babesiosis, the most important economic disease transmitted by arthropods. The invasion process of B. bovis to the bovine erythrocytes consists of four steps: 1) Parasite attachment to the RBCs, 2) Merozoite reorientation, 3) Tight junction or moving junction, and 4) parasite internalization inside the RBCs; some proteins identified and characterized in different apicomplexan parasites have functions involved in this process and have been proposed as vaccine candidates. Although, the B-cell epitopes of these proteins that elicit a neutralizing immunity have not been identified and characterized yet in B. bovis. Therefore, in this study the B-cell epitopes inside conserved regions of AMA-1, RAP-1, MSA-2c, RON-2, yMIC-1 proteins were identified with bioinformatics analysis. These regions were synthesized as multi-antigen peptide system of eight branches (MAPS8) and immunized four times in two bovines for each peptide. Pre and post-immunization sera samples were collected and evaluated by ELISA, just the peptides P1-AMA1 and P1-MSA2c did not elicited an immune response with a negative result in the ELISA test, the others shown titers of 1:2000 in both immunized bovines, except the peptides P2-AMA1, P2-RAP1 and P3-RAP1. Even though all these serum samples were able of recognize the blood stage parasites in an Indirect Fluorescence Antibody Test, just 9 of out 23 were able to block the invasion process in the in vitro neutralization assay. Some of these peptides were also recognized by sera from naturally infected cattle. These results are evidence that not all the B-cell epitopes of these proteins elicit a humoral and neutralizing immunity. Therefore, this immunological characterization allowed the identification of peptides that generate an immune response in bovines with the presence of neutralizing antibodies that block the invasion process, making these peptides potential vaccine candidates.
URI:	http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1421
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