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Title: Identificación y caracterización inmunomolecular de proteínas de Babesia vogeli involucradas en el mecanismo de invasión a los eritrocitos
metadata.dc.creator: Aldo Josué Pavón Rocha
Keywords: CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA;CIENCIAS DE LA VIDA;CIENCIAS VETERINARIAS
metadata.dc.date: 30-Apr-2021
Description: La babesiosis canina es una enfermedad infecciosa, transmitida por garrapatas, causada por protozoarios del género Babesia. Babesia vogeli es la especie de piroplasma con mayor distribución a nivel mundial y la que se ha descrito ocurriendo de manera natural en perros de México. El mecanismo de invasión de Babesia al eritrocito es muy similar al de otros microorganismos Apicomplexa; estos utilizan una serie de proteínas posicionadas en el polo apical para lograr ingresar a la célula blanco. Las proteínas AMA-1 (antígeno de membrana apical 1) y RAP-1 (proteína asociada a las roptrías 1) son secretadas durante la invasión del parásito a los eritrocitos y por ende, han sido objeto de estudio debido a su importancia biológica. Hasta ahora, no se ha descrito ninguna de estas proteínas en B. vogeli, agente causal de la babesiosis canina en México. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los antígenos AMA-1 y RAP-1 de B. vogeli y comprobar su expresión en la fase intraeritrocítica. Mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y secuenciación automatizada de Sanger se obtuvo un fragmento de 407 pares de bases correspondiente a una secuencia de 86 aminoácidos de la proteína AMA-1 y el gen completo de 1,335 pares de bases correspondiente a una secuencia de 444 aminoácidos de la proteína RAP-1 de B. vogeli. La expresión de ambos genes se comprobó en las fases intraeritrocíticas mediante un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con retrotranscripción (RT-PCR). Asimismo, utilizando herramientas bioinformáticas se diseñaron dos péptidos de cada proteína que contienen epítopos B predichos y se enviaron a sintetizar en sistema de dendrímeros de 8 ramas. Se inmunizaron dos conejos Nueva Zelanda con cada uno de estos péptidos, 4 veces con intervalos de 21 días; posterior a esto, se determinó la generación de anticuerpos en suero sanguíneo obtenido de cada uno de los conejos durante cada una de las inmunizaciones mediante ensayo de ELISA indirecta. Por último, con los sueros hiperinmunes se realizaron inmunofluorescencias indirectas, comprobando que anticuerpos anti AMA-1 y anti RAP-1 reconocen los merozoítos de B. vogeli con un patrón de fluorescencia en el complejo apical, confirmando la expresión de ambas proteínas. Con este trabajo se concluye que las proteínas AMA-1 y RAP-1 son expresadas en las fases intraeritrocíticas de B. vogeli y contienen epítopos B capaces de desarrollar una respuesta inmunológica de tipo humoral en un modelo in vivo.
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/2810
Other Identifiers: Apicomplexa
Babesiosis canina
Babesia vogeli
Eritrocito
Invasión
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