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Title: Evaluación de niveles de expresión de la proteína beta-lactoglobulina en leche de vaca Jersey
metadata.dc.creator: MARTHA ANGELICA TELLO SANCHEZ
Keywords: CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA;QUÍMICA;BIOLOGÍA MOLECULAR
metadata.dc.date: 15-Jan-2020
Description: La leche materna provee los requerimientos nutricionales para el desarrollo infantil, no obstante, en México, el consumo de fórmulas infantiles (FI) aumenta 5.5 % anualmente. Las FI se fabrican mayormente con leche de bovino, que tiene diferencias importantes en proteínas como caseínas, α-lactoalbúmina y β-lactoglobulina (β-Lg). La β-Lg no está presente en la leche humana, por ello es uno de los principales alérgenos en leche bovina. Existen alrededor de 12 variantes genéticas, con pesos moleculares y puntos isoeléctricos muy similares, A y B son las más comunes. La respuesta inmune, mayormente a la variante A, puede causar desórdenes gastrointestinales, alteraciones en la proliferación celular y diabetes infantil tipo 2. El objetivo de este trabajo es la purificación, identificación e inmunodetección de las variantes de β-Lg en leche de vaca Jersey y el desarrollo de una técnica para la genotipificación del ganado. El esquema de purificación diseñado se aplicó a leche cruda. La cuantificación de proteínas por el método fluoromético Qubit y se probaron tres métodos electroforéticos para la separación de las variantes. Se llevaron a cabo la inmunodetección de β-Lg y su variante B y la genotipificación por la longitud de los fragmentos de restricción de los polimorfismos (PCR-RFLP) por digestión con la enzima HaeIII. Mediante la estrategia de purificación, se obtuvo un concentrado de proteínas de suero con 83 % de β-Lg. La separación de dos bandas cercanas a 18.4 kDa, peso molecular de la β-Lg, se logró por SDS-PAGE con geles de gradiente. La inmunodetección confirmó que las bandas obtenidas correspondían a las variantes de β-Lg, sin embargo no fue posible la distinción por la detección de la variante B. Con muestras de DNA genómico se obtuvo un producto de amplificación de 252 pb (Exón IV del gen β-Lg). La digestión con HaeIII reveló que el genotipo de mayor frecuencia fue el heterocigoto AB con un 45 %. Este trabajo permitió sentar las bases para desarrollar un método de identificación y diferenciación de las variantes genéticas de β-Lg en ganado, generando la oportunidad de continuar investigaciones para su estandarización y aplicación como método de rutina a nivel industrial.
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1871
Other Identifiers: Variantes genéticas de beta-lactoglobulina
leche de ganado Jersey
Fórmulas infantiles
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