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Title: Producción de las proteínas recombinantes RpfB, RipA, ESAT-6 y CFP-10deMycobacterium spp.
metadata.dc.creator: JESSICA SALDAÑA ZEPEDA
Keywords: MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD;DESARROLLO ANIMAL
metadata.dc.date: 8-Dec-2017
Description: La tuberculosis bovina es una enfermedad bacteriana crónica del ganado causada por Mycobacterium bovis. El interés mundial en su control y erradicación se justifica debido a que genera pérdidas económicas importantes, además del riesgo que representa en la salud pública. La identificación y eliminación temprana de los animales enfermos es la base de los programas de erradicación de la tuberculosis bovina,sin embargo,debido a las limitaciones que presenta el diagnóstico, es necesario incorporar nuevos métodos que permitan mejorar susensibilidad, especificidad y rapidez.La identificación de proteínas desecreción de M. bovisque indican la infección en el hospedero bovino,sería de utilidad en el diseño de nuevos métodos de diagnóstico. El objetivo de este trabajo fue la producción recombinante y expresión de las proteínas extracelulares y de secreción,RpfB, RipA, ESAT-6 y CFP-10 de Mycobacteriumspp.Coneste propósito los genes correspondientes se amplificaronpor PCR a partir de ADN genómico de M. tuberculosisy clonados en los vectores de expresión seleccionados. Después de optimizar las condiciones de expresión de las proteínas, se logró obtener cantidad suficientede RpfB (4,104 μg/L de cultivo), ESAT-6 (8,282 μg/L de cultivo) y CFP-10(2,093 μg/L de cultivo) para realizar diversos ensayos.En el caso de RipA, el rendimiento fue menor (495 μg/L de cultivo),por lo que se realizó un cultivo a gran escala con el fin de obtener la cantidad necesaria de esta proteína para su evaluación,no obstante, sise determina su utilidad se sugiere emplear un sistema de expresión alternativo.Las proteínas recombinantes mencionadas podrán utilizarse enla producción de anticuerpos, los cuales tienen gran potencial en la identificación de antígenos de M. bovisen suero y/o tejidos de bovinos infectados.
Bovine tuberculosis is a chronic bacterial disease of cattle caused by Mycobacterium bovis. The global interest in its control and eradication is justified because it generates important economic losses, in addition to the risk that it represents for public health. The identification and early elimination of diseased animals is the basis of the programs for the eradication of bovine tuberculosis, however, due to the limitations of the diagnosis, it is necessary to incorporate new methods to improve its sensitivity, specificity and speed. The identification of M. bovis secretion proteins indicating infection in the bovine host would be useful in the design of new diagnostic methods. The objective of this work was the recombinant production and expression of extracellular and secretory proteins RpfB, RipA, ESAT-6 and CFP-10.ofMycobacteriumspp.For this purpose the corresponding genes were amplified by PCR from genomic DNA of M. tuberculosis and cloned into the selected expression vectors. After optimizing theexpression conditions of the proteins, they were produced and sufficient RpfB (4,104 μg / L culture), ESAT-6 (8,282 μg / L culture) and CFP-10 (2,093 μg / L of culture) to perform several tests. In the case of RipA, the yield was lower (495 μg / L of culture), so it was necessary to perform a large scale culture to obtain the necessary amount of this protein for evaluation, however, if its usefulness is determined it is suggested to employ an alternative expression system. The recombinant proteins mentioned may be used for the production of antibodies, which have great potential in the identification of M. bovis antigens in infected bovine serum and / or tissues.
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1363
Other Identifiers: Tuberculosis bovina
Mycobacterium bovis
proteínas de secreción
proteínas recombinantes
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