Escherichia coli patógena extraintestinal (ExPEC) es un microorganismo que afecta a la salud humana y animal, por lo tanto, es necesario el uso de la estrategia “Una Salud”, para la vigilancia de este tipo de microorganismos. En humanos causa infecciones de tracto urinario, sepsis y meningitis; en animales, afecta principalmente a aves de granja, causando colibaciliosis. La presencia de este tipo de infección en aves puede llevar a la contaminación de los alimentos que se producen en estas granjas, como la carne de pollo y el huevo; y por medio de la cadena alimentaria llegar a infectar a los humanos. La identificación de ExPEC es posible mediante la detección de genes de virulencia previamente descritos. En este trabajo se realizó la búsqueda de cinco determinantes de virulencia (iutA, hlyF, iss, iroN y ompT), en aislamientos obtenidos de tejidos y lesiones de origen avícola mediante PCR multiplex. Se confirmó como E. coli a los 115 aislamientos ExPEC, mediante PCR para el gen 16S rRNA. La prevalencia de cada uno de los genes evaluados fue iutA 64.3%, hlyF 91.3%, iroN 80.9%, iss 74.8% y ompT 88.7%. Mediante un análisis bioinformático se encontró registros de otras enterobacterias que presentan los factores de virulencia codificados por los genes iutA, hlyF, iss, iroN y ompT, siendo reportados los géneros Salmonella, Shigella, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter principalmente. Con este trabajo resalta la importancia de la detección de microorganismos virulentos, por su capacidad de diseminar sus genes de virulencia a otros microorganismos. Además, del monitoreo de estas cepas con potencial de causar enfermedad en el ámbito avícola y de salud pública.