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dc.rights.license http://creativecommons.org/licenses/by-nd/4.0 es_ES
dc.contributor Luis Gabriel Brieba De Castro es_ES
dc.creator Anibal Raziel Lara Vázquez es_ES
dc.date 2010
dc.date.accessioned 2017-01-25T20:54:28Z
dc.date.available 2017-01-25T20:54:28Z
dc.date.issued 2010
dc.identifier 1590 - RI003558.PDF es_ES
dc.identifier.uri https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/7435
dc.description Las proteínas de caja DEAD son proteínas que se encuentran dentro de una amplia variedad de organismos y se caracterizan por tener actividad de tipo helicasa dependiente de ATP. Se encuentran involucradas en aspectos básicos del metabolismo de los ácidos nucleicos. Las constantes de actividad enzimática obtenidas para algunas de ellas han reflejado diferencias y similitudes significativas entre especies relacionándolo con los aspectos fisiológicos y bioquímicos de cada especie. En B. subtilis, una bacteria de gran importancia a nivel industrial, y principal modelo de estudio de los gram positivos hay 5 proteínas de caja DEAD (YfmL, YdbR, YqfR, YxiN y YprA) de las cuales solo YxiN y YdbR han sido caracterizadas bioquímicamente. Con el fin de poder hacer un análisis comparativo de las funciones de estas proteínas con otras ya previamente caracterizadas, en este trabajo se obtuvo la proteína YfmL (42 kDa), para ello se extrajo el DNA genómico de la cepa PY79 de B. subtilis y del cual se amplificó el gen yfmL de 1128 pb por PCR. Posteriormente se digirió el producto de PCR yfmL con XbaI y EcoRI y el vector de expresión pCold I para formar la construcción pCold-yfmL, la cual fue transformada en la cepa huésped E. coli TOP10 por electroporación. Las colonias transformantes fueron analizadas por PCR y posteriormente se extrajeron los plásmidos. Se confirmó la presencia del inserto mediante la digestión enzimática de plásmidos con XbaI y EcoRI. La cepa de E.coli BL21¿Star fue transformada con la construcción pCold-yfmL mediante choque térmico y la expresión fue inducida con IPTG 0.5 mM a 16°C por 21 horas. Posteriormente se purificó la proteína recombinante mediante cromatografía de afinidad de histidinas y finalmente por cromatografía de intercambio iónico. es_ES
dc.format Adobe PDF es_ES
dc.language.iso spa es_ES
dc.publisher Universidad Autónoma de Querétaro es_ES
dc.relation.requires No es_ES
dc.rights Acceso Abierto es_ES
dc.subject Clonación molecular es_ES
dc.subject Expresión heterologa es_ES
dc.subject DEAD es_ES
dc.title Clonación molecular, expresión heterologa y purificación de YFML: una RNA helicasa de la familia DEAD es_ES
dc.type Tesis de licenciatura es_ES
dc.contributor.role Director es_ES
dc.degree.name Ingeniería en Biotecnología es_ES
dc.degree.department Facultad de Química es_ES
dc.degree.level Licenciatura es_ES


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Nombre: RI001590.PDF
Tamaño: 773.5Kb
Formato: PDF
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