Clonación molecular, expresión heterologa y purificación de YFML: una RNA helicasa de la familia DEAD

Anibal Raziel Lara Vázquez

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dc.rights.license	http://creativecommons.org/licenses/by-nd/4.0	es_ES
dc.contributor	Luis Gabriel Brieba De Castro	es_ES
dc.creator	Anibal Raziel Lara Vázquez	es_ES
dc.date	2010
dc.date.accessioned	2017-01-25T20:54:28Z
dc.date.available	2017-01-25T20:54:28Z
dc.date.issued	2010
dc.identifier	1590 - RI003558.PDF	es_ES
dc.identifier.uri	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/7435
dc.description	Las proteínas de caja DEAD son proteínas que se encuentran dentro de una amplia variedad de organismos y se caracterizan por tener actividad de tipo helicasa dependiente de ATP. Se encuentran involucradas en aspectos básicos del metabolismo de los ácidos nucleicos. Las constantes de actividad enzimática obtenidas para algunas de ellas han reflejado diferencias y similitudes significativas entre especies relacionándolo con los aspectos fisiológicos y bioquímicos de cada especie. En B. subtilis, una bacteria de gran importancia a nivel industrial, y principal modelo de estudio de los gram positivos hay 5 proteínas de caja DEAD (YfmL, YdbR, YqfR, YxiN y YprA) de las cuales solo YxiN y YdbR han sido caracterizadas bioquímicamente. Con el fin de poder hacer un análisis comparativo de las funciones de estas proteínas con otras ya previamente caracterizadas, en este trabajo se obtuvo la proteína YfmL (42 kDa), para ello se extrajo el DNA genómico de la cepa PY79 de B. subtilis y del cual se amplificó el gen yfmL de 1128 pb por PCR. Posteriormente se digirió el producto de PCR yfmL con XbaI y EcoRI y el vector de expresión pCold I para formar la construcción pCold-yfmL, la cual fue transformada en la cepa huésped E. coli TOP10 por electroporación. Las colonias transformantes fueron analizadas por PCR y posteriormente se extrajeron los plásmidos. Se confirmó la presencia del inserto mediante la digestión enzimática de plásmidos con XbaI y EcoRI. La cepa de E.coli BL21¿Star fue transformada con la construcción pCold-yfmL mediante choque térmico y la expresión fue inducida con IPTG 0.5 mM a 16°C por 21 horas. Posteriormente se purificó la proteína recombinante mediante cromatografía de afinidad de histidinas y finalmente por cromatografía de intercambio iónico.	es_ES
dc.format	Adobe PDF	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Autónoma de Querétaro	es_ES
dc.relation.requires	No	es_ES
dc.rights	Acceso Abierto	es_ES
dc.subject	Clonación molecular	es_ES
dc.subject	Expresión heterologa	es_ES
dc.subject	DEAD	es_ES
dc.title	Clonación molecular, expresión heterologa y purificación de YFML: una RNA helicasa de la familia DEAD	es_ES
dc.type	Tesis de licenciatura	es_ES
dc.contributor.role	Director	es_ES
dc.degree.name	Ingeniería en Biotecnología	es_ES
dc.degree.department	Facultad de Química	es_ES
dc.degree.level	Licenciatura	es_ES