Introducción: Las enterobacterias son una de las causas más importante de infecciones nosocomiales y adquiridas en la comunidad; entre las cuales algunas enterobacterias producen betalactamasas que son enzimas capaces de inactivar los antibióticos de la familia betalactámicos pero no los carbapenémicos. Objetivo: Determinar la prevalencia de cultivos con desarrollo de bacterias productoras de Bacterias productoras de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) en pacientes mayores de 18 años de edad en el Hospital General Regional No. 1 Querétaro. Metodología: Se realizó un estudio transversal, retrospectivo y descriptivo en expedientes y cultivos de pacientes mayores de 18 años, en los cuales se haya procesado algún tipo de muestra para cultivo que sea positivos a bacterias BLEE; analizando la sensibilidad y la resistencia a los antibióticos mediante reportes automatizados (estandarizados de forma automatizada). Se utilizó el antibiograma reportado para estas bacterias. Se calculó un tamaño de muestra de 236 cultivos positivos a BLEE. Se revisaron cultivos llevados a cabo del 1º de enero del 2020 al 31 de diciembre del 2020. El análisis estadístico incluyó estadística descriptiva, con promedios y frecuencias absolutas y relativas. La presente investigación se apega a las normas éticas institucionales y a la Ley General de Salud y a la declaración de Helsinki. Resultados: Se reportaron 2498 cultivos que cumplían los criterios de inclusión y exclusión. Un total de 585 muestras resultaron positivas a cualquier bacteria. Cultivos positivos a bacterias BLEE fueron 198 (33.8%) cultivos, de los cuales 65.1% fueron mujeres, el rango de edad en donde se evidenciaron mayor reporte de cultivos BLEE positivos fue entre los 59 y 68 años de edad. El sitio en donde crecieron bacterias BLEE positivas fueron 2 en aspirado bronquial, 31 hemocultivos, 165 urocultivos. Conclusiones: Se encontró una prevalencia de cultivos positivos a bacterias BLEE del 33.8% en diferentes cultivos reportados en el HGR1 lo cual es igual a la prevalencia reportada en otros artículos.