"Los microorganismos pertenecientes al grupo de Bacillus cereus sensu lato (B. cereus s.l.) se caracterizan por ser formadores de esporas altamente resistentes al calor, actividad lecitinasa y ausencia de fermentación de manitol; el medio ampliamente utilizado para su detección es el agar manitol egg yolk-polymixin (MYP) pero su selectividad es escasa. El diagnóstico microbiológico se basa en pruebas fenotípicas, sin embargo, existen diversas variantes atípicas, que dificultan la identificación, siendo esta solo a nivel presuntivo. Al considerar los factores de virulencia, pueden ser expresados o no; así, la identificación de toxinas tampoco es concluyente. Por lo cual es relevante contar con una prueba que confirme la presencia del agente etiológico de manera rápida y confiable. Considerando que los tRNA son moléculas esenciales en la traducción del código genético y qué filogenéticamente pueden ser usados para categorizaciones taxonómicas, en este trabajo se evaluó el gen trna-cys en una prueba de PCR para la detección y diferenciación de miembros del grupo B. cereus sensu lato. A partir de las bases de datos disponibles se evaluó in silico la región genómica asociada río abajo del gen trna-cys, encontrando que la mayoría de los miembros del grupo de B. cereus s.l. presenta una sola copia del isoaceptor en su genoma y que la región de estudio difiere de otras especies del género Bacillus. El análisis por PCR punto final de los aislados bacterianos y de la cepa control Bacillus cereus ATCC 10876, demostró la efectividad de la estrategia molecular para la detección de colonias fenotípicamente sospechosas pertenecientes al grupo de B. cereus s.l. El análisis filogenético de las secuenciaciones de los amplicones obtenidos por PCR confirmó la relación taxonómica de las cepas presuntivas, por lo que el resultado permitió corroborar nuestra hipótesis que es posible utilizar la región genómica asociada al gen trna-cys del grupo Bacillus cereus sensu lato cómo un método molecular adicional para la detección de miembros del grupo de B. cereus s.l."