Las lectinas del frijol Tépari (Phaseolus acutifolius) exhiben efectos biológicos diferenciales in vitro e in vivo, pero sus interacciones gastrointestinales y con el proceso de digestión aún no se han evaluado. Este trabajo tuvo como objetivo determinar la bioaccesibilidad y permeabilidad intestinal de la rTBL-1 de frijol Tépari mediante un modelo de digestión gastrointestinal in vitro/ ex vivo. Se desarrolló un anticuerpo policlonal para detectar selectivamente rTBL-1 mediante Western blot (WB) y análisis inmunohistoquímico. No fue posible identificar lectina recombinante integra en un análisis in vivo, por lo que se realizó un ensayo in vitro/ex vivo. Se confirmó la viabilidad del saco intestinal invertido hasta los 60 min, donde la bioaccesibilidad de las proteínas, el coeficiente de permeabilidad aparente y la relación de flujo mostraron digestión y absorción parcial de rTBL-1. Los ensayos de inmunotransferencia sugirieron internalización de rTBL-1 ya que la lectina se detectó en la fracción digestible. El ensayo inmunohistoquímico detectó la presencia de rTBL-1 en el lado apical del intestino delgado, potencialmente debido a la interacción con la membrana celular intestinal. Las interacciones in silico entre rTBL-1 y algunos sacáridos o derivados mostraron una alta afinidad de unión al ácido siálico (-6.70 kcal/mol) y N-acetilglucosamina (-6.10 kcal / mol). El análisis UHPLC-ESI-QTOF /MS mostró la presencia de rTBL-1 en el contenido gástrico y la fracción no digerible después de las condiciones de simulación intestinal. Los resultados indicaron que rTBL-1 resistió parcialmente las condiciones digestivas e interactuó con la membrana intestinal, mientras que su digestión permitió la absorción o internalización de la proteína o los péptidos derivados. Es necesario realizar una purificación adicional de las muestras de digestión para identificar la proteína rTBL-1 intacta y los péptidos digeridos para evaluar sus efectos fisiológicos.