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dc.rights.license http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0 es_ES
dc.contributor Edgardo Ulises Esquivel Naranjo es_ES
dc.creator Jairo Sánchez Flores es_ES
dc.date 2021-02-18
dc.date.accessioned 2020-02-17T18:02:41Z
dc.date.available 2020-02-17T18:02:41Z
dc.date.issued 2021-02-18
dc.identifier.uri http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/2060
dc.description El hongo Trichoderma atroviride tiene un genoma atractivo para estudiar micoparasitismo, metabolismo y fotomorfogénsesis, debido a sus características biológicas distintivas como capacidad antagonista contra hongos fitopatógenos, amplio repertorio enzimático, conidiación inducida por luz azul y un efecto promotor de crecimiento en plantas. Análisis genómicos han mostrado genes clave para comprender procesos evolutivos, incluyendo micoparasitismo e interacciones recíprocas hongo-planta. Hasta la fecha, se han desarrollado y mejorado diversas herramientas genéticas con el objetivo de descubrir funciones de genes en hongos filamentosos, a pesar de eso la identificación de los genes mutados sigue siendo un cuello de botella en las estrategias de genómica funcional. En este trabajo, desarrollamos una nueva estrategia de mutagénesis, basada en la integración plasmídica por recombinación homóloga, facilitando la identificación de los genes interrumpidos. El plásmido pCB1004 fue utilizado para construir una biblioteca genómica, la cual contenía fragmentos de ADN de T. atroviride con tamaños entre 0.75 y 1.5 kbp. Después de dos pases monospóricos de cepas transformantes en medio selectivo con higromicina B, se realizaron pruebas de estabilidad para el marcador de selección, revelando que 224 de 800 transformantes resultaron estables, sugiriendo la integración del plásmido en el genoma en el 28% de las transformantes. En orden de determinar la identidad de las inserciones del plásmido, se implementó un nuevo enfoque de identificación a través de PCR y secuenciación. Los resultados indicaron que las inserciones ocurrieron mayoritariamente en eventos independientes únicos y dobles, distribuidas al azar a través del genoma de T. atroviride. La caracterización fenotípica de las transformantes a estrés metabólico, daño mecánico y ensayos de fotoinducción permitió determinar funciones génicas previamente no descritas en cepas mutantes con un crecimiento muy reducido (ID proteínas: 52977 unión a metales de transición, 143930 modificación y procesamiento de RNA, 317064 actividad de transporte, 33929 remodelación de la cromatina, 298021 función desconocida y 233373 actividad de transporte) y afectadas en fotoconidiación (48079 péptido sintetasa no ribosomal, 81320 actividad catalítica, 39327 actividad de transporte, 173440 plegamiento de proteínas, 307447 ubiquitina ligasa y factor de corte y empalme del ARNm ). En conjunto, nuestros datos proveen evidencia del potencial promisorio de esta estrategia de mutagénesis, siendo una de sus mejores bondades la rapidez y facilidad para identificar el gen afectado. es_ES
dc.format Adobe PDF es_ES
dc.language.iso Español es_ES
dc.relation.requires No es_ES
dc.rights En Embargo es_ES
dc.subject Trichoderma atroviride es_ES
dc.subject Mutagénesis insercional es_ES
dc.subject Recombinación es_ES
dc.subject Homóloga es_ES
dc.subject Interrupción de genes es_ES
dc.subject.classification BIOLOGÍA Y QUÍMICA es_ES
dc.title Mutagénesis insercional mediada por recombinación homóloga en el hongo Trichoderma atroviride es_ES
dc.type Tesis de licenciatura es_ES
dc.creator.tid CURP es_ES
dc.contributor.tid curp es_ES
dc.creator.identificador SAFJ951226HQTNLR14 es_ES
dc.contributor.identificador EUNE710817HMNSRD15 es_ES
dc.contributor.role Director es_ES
dc.degree.name Licenciatura en Microbiología es_ES
dc.degree.department Facultad de Ciencias Naturales es_ES
dc.degree.level Licenciatura es_ES


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Nombre: RI005121.pdf
Tamaño: 2.828Mb
Formato: PDF
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