La Babesiosis bovina es una enfermedad parasitaria del ganado bovino generada por B. bovis y B. bigemina principalmente, que causa pérdidas económicas significativas al afectar a más del 65% del ganado bovino en México. A la fecha, el diagnóstico rápido por serología utiliza anticuerpos monoclonales poco específicos, por lo que su identificación se realiza por microscopía de campo claro al encontrar parásitos intraeritrocíticos en forma de pera. No obstante, varias proteínas de Babesia involucradas en el proceso de invasión al eritrocito han sido investigadas como blanco terapéutico y de diagnóstico, tal como la proteína asociada a roptrias (RAP-1) de B. bovis que proviene de dos genes idénticos con repeticiones en tándem y secuencias con homología entre distintas cepas geográficas. El antígeno RAP-1 fue utilizado como base en trabajos previos para la generación de un péptido sintético (RAP1-P3BBOV) con una secuencia de aminoácidos conservada entre las distintas cepas de B. bovis reportadas a nivel mundial. Dicho péptido se utilizó en el presente trabajo para la inmunización de ratones de la cepa BABL/c de donde se consiguió un animal que generó títulos de anticuerpos anti- RAP1-P3BBOV superiores al punto de corte del control negativo a una dilución 1:4000. A partir de ello, se realizó la fusión celular con el bazo de dicho ratón y posteriormente la selección bioquímica y evaluación de los hibridomas por ELISA indirecto, de donde resultó un total de tres líneas clonales distintas con un total de 29 sub-clonas que fueron congeladas y 50 sub-sub-clonas, de las que 12 se utilizaron para la identificación de la especificidad contra la proteína nativa RAP-1 de B. bovis, obteniendo dos de ellas con resultados positivos.