Título :	Desarrollo y estandarización de un inmunoensayo ligado a enzima indirecto basado en la proteína CHPV 1.9 para el diagnóstico de Babesia bovis y Babesia bigemina
Autor(es):	Sergio Mc Daniel Cárdenas Rodríguez
Palabras clave:	Ciencias Agropecuarias Y Biotecnología Ciencias Agrarias Inmunología
Fecha de publicación :	12-dic-2023
Editorial :	Ciencias Naturales
Facultad:	Facultad de Ciencias Naturales
Programa académico:	Maestría en Salud y Producción Animal Sustentable
Resumen:	La babesiosis bovina es una enfermedad transmitida por garrapatas causada por parásitos del género Babesia. El diagnóstico convencional de la enfermedad es mediante frotis sanguíneo e inmunofluorescencia indirecta (IFI). Estos métodos son subjetivos y el número de muestras que pueden procesar es limitado. Los inmunoensayos ligados a enzima (ELISA) permiten procesar un gran número de muestras al mismo tiempo. Además, permiten realizar un diagnóstico objetivo y sensible. El objetivo de este trabajo fue el desarrollo y estandarización de un ELISA indirecto, utilizando una proteína recombinante (CHPV1.9), que contiene péptidos de Babesia bigemina. La proteína fue producida en un biorreactor, expresada al inicio de la fase exponencial del cultivo y se colectó la biomasa para su purificación. La purificación de la CHPV1.9 se logró usando cromatografía de afinidad, utilizando urea para solubilizar los cuerpos de inclusión y liberar la proteína. La proteína fue cuantificada por el método de Bradford y acoplada a una microplaca de 96 pozos. Se ajustaron los parámetros de concentración de proteína recombinante, dilución del suero, dilución del anticuerpo secundario y el tiempo de revelado para la estandarización del ELISA. Se determinó la sensibilidad diagnóstica (DSe) y especificidad diagnóstica (DSp) de la prueba utilizando sueros positivos y negativos a la enfermedad colectados de animales de campo. El ELISA fue comparado con respecto a los resultados de esos mismos sueros evaluados por la “prueba de oro”, la IFI. Se obtuvo una alícuota de la proteína purificada con una concentración de 1003 µg/ml. El ELISA estandarizado alcanzó una DSe del 82.26%, una DSp del 91.49% y un valor de kappa (k) de 0.724; esto al utilizar un punto de corte igual a la media de los sueros negativos más dos desviaciones estándar de estos. Se determinó un segundo punto de corte (0.4495) para la técnica utilizando curva receptor operador (ROC), obteniendo una DSe de 88.71%, una DSp de 95.74% y un valor k de 0.834. La técnica estandarizada cumple con lo establecido en el Manual de las Pruebas Diagnósticas y de las Vacunas de los Animales Terrestres de la OIE, el siguiente paso es la validación de la técnica para que pueda ser utilizada para el diagnóstico de la babesiosis bovina.
URI:	https://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/8636
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