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Title: Caracterización de un anticuerpo monoclonal de ratón contra la proteína de superficie de merozoito 45 de Babesia bigemina
metadata.dc.creator: Sergio Mc Daniel Cárdenas Rodríguez
Keywords: CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA;CIENCIAS MÉDICAS;INMUNOLOGÍA
metadata.dc.date: 1-Jan-2021
Description: La babesiosis bovina es una enfermedad transmitida por parásitos intracelulares del género Babesia. En México las especies presentes son B. bigemina y B. bovis, las cuales son transmitidas por garrapatas del género Rhipicephalus. La enfermedad en los animales ocasiona anemia, hemoglobinuria, debilidad, ictericia y la muerte. El 80% del inventario nacional de bovinos se encuentra en zonas endémicas de la garrapata. La detección temprana de la enfermedad es necesaria para su control, por lo tanto, herramientas de diagnóstico como los anticuerpos monoclonales son necesarias. El objetivo de este trabajo fue la caracterización de un anticuerpo monoclonal contra la proteína GP-45 de Babesia bigemina, así como su producción en un medio de cultivo libre de suero fetal bovino (SFB). Hibridomas de ratón, productores de un anticuerpo monoclonal, fueron descongelados y mantenidos in vitro. Los hibridomas fueron adaptados a un medio libre de SFB. Para esto, cada 7 días se redujo 1% de SFB al medio de cultivo empezando en un 10% hasta alcanzar un 0% de SFB. Los sobrenadantes de la adaptación fueron colectados periódicamente y evaluados por ELISA indirecta con antígeno crudo para detectar la presencia de anticuerpos. Los sobrenadantes de cultivo con 10, 7, 5, 3, 2 y 1% de SFB fueron evaluados por ELISA indirecta con péptido lineal de GP-45. Se realizaron inmunofluorescencias con los sobrenadantes de cultivo para observar el patrón de tinción logrado con el anticuerpo monoclonal. En todos los procedimientos se utilizó el sobrenadante de cultivo sin diluir. Hasta el día 15 después de la descongelación, los hibridomas comenzaron a crecer homogéneamente y se mantuvieron con crecimiento constante sin perjudicar el desarrollo de las células. Se observó una mayor señal en la prueba de ELISA con el antígeno crudo que con el péptido lineal. En las inmunofluorescencias el anticuerpo monoclonal se une a estructuras semejantes a la Babesia. Sin embargo, no presentó el mismo patrón de tinción, comparado con el control positivo. Se concluye que el anticuerpo monoclonal evaluado puede ser obtenido en medio libre de SFB y que, aunque requiere mayor caracterización, puede ser utilizado para pruebas diagnósticas para la babesiosis bovina causada por B. bigemina.
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/2376
Other Identifiers: Babesia bigemina
anticuerpo monoclonal
ELISA
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