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Title: Patrón de expresión y evaluación de la función de los genes mctp del pez cebra Danio rerio, que codifican para proteínas transmembranales con múltiples dominios C2
metadata.dc.creator: Angeles Edith Espino Saldaña
Keywords: BIOLOGÍA Y QUÍMICA;CIENCIAS DE LA VIDA;BIOLOGÍA MOLECULAR
metadata.dc.date: 2-Apr-2021
Description: Las proteínas MCTP, llamadas así por su siglas en inglés “Multiple C2 and transmembrane domain containing protein” presentan tres dominios C2 y dos pases transmembranales que unen Ca2+ en ausencia de fosfolípidos, y esto hace que sus propiedades sean únicas; sin embargo, su papel funcional no está bien descrito. En vertebrados, MCTP se expresa principalmente en cerebro, corazón y músculo esquelético, aunque también en hígado, riñón, testículo y otros órganos. A nivel subcelular, en motoneuronas de Drosophila melanogaster, se ha reportado que se localiza en retículo endoplásmico; además, se ha detectado en endosomas y en vesículas secretorias de neuronas de rata en cultivo primario. A nivel funcional, también en D. melanogaster, se encontró que la deleción del gen Mctp afecta la estabilidad homeostática de la neurotransmisión, sugiriendo que la proteína MCTP funciona como un sensor de Ca2+. El pez cebra (Danio rerio) es un excelente modelo biológico para llevar a cabo estudios de biología molecular, desarrollo y función del sistema nervioso en vertebrados. Ofrece diversas ventajas y es relativamente fácil de manipularlo genéticamente utilizando sistemas tales como el CRISPR/Cas9. En este trabajo, determinamos el patrón de expresión de los genes mctp del pez cebra por RT-PCR, así como su localización espaciotemporal en embriones en varias etapas del desarrollo utilizando hibridación in situ. Clonamos y secuenciamos los cDNAs de los genes mctp, y finalmente evaluamos los efectos provocados por la disrupción del gen mctp2b utilizando el sistema CRISPR/Cas9. Determinamos que en el genoma del pez cebra se encuentran cuatro genes mctp: mctp1a, mctp1b, mctp2a y mctp2b. Los cuatro genes se expresan desde las primeras etapas del desarrollo, así como en todos los tejido analizados en pez adulto, aunque presentan un patrón de expresión diferencial, siendo mctp2b el más abundante. Además, encontramos una alta frecuencia de cambios de nucleótido, y también que tres de los genes presentan eventos de empalme alternativo. Finalmente, hemos mostrado que la disrupción del gen mctp2b afecta el desarrollo normal del embrión, esto sugiere que hay una importante participación funcional durante las primeras etapas del desarrollo.
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/2120
Other Identifiers: mctp
pez cebra
CRISPR
Dominios C2
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