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Title: Análisis de la dinámica de calcio en neuronas motoras del knock out del gen mctp-1 en el nematodo Caenorhabditis elegans
metadata.dc.creator: Alma Leticia Avilés García
Keywords: BIOLOGÍA Y QUÍMICA;CIENCIAS DE LA VIDA;BIOLOGÍA MOLECULAR
metadata.dc.date: 17-Dec-2019
Description: Existe una familia de proteínas denominadas MCTPs (Proteínas con múltiples dominios C2 y regiones transmembranales) que presentan tres dominios C2 y dos regiones transmembranales. Las MCTPs están relacionadas estructuralmente con otras proteínas que presentan dominios C2 como las sinaptotagminas y ferlinas de las cuales se sabe ejercen funciones importantes en la transmisión sináptica, la transducción de señales y tráfico de membrana, en donde los dominios C2 actúan como sensores de la concentración del ion calcio (Ca2+). No obstante, hasta ahora se sabe poco acerca de la función general de las MCTPs. En estudios recientes en el nematodo Caenorhabditis elegans se ha demostrado que el promotor del gen mctp-1 dirige la expresión de un gen reportero GFP en la mayoría de las neuronas y que su supresión mediante la técnica de CRISPR/Cas9 genera cambios motores que se reflejan en el comportamiento de coleteos en medio líquido y una reducción de la tasa de huevos; por lo que se infiere que la proteína MCTP-1 pudiese jugar un papel en la transmisión sináptica. El objetivo del presente proyecto ha sido determinar si la actividad sináptica se ve modificada cuando se suprime el gen mctp-1 en C. elegans. Para ello se utilizó un sensor de la concentración de calcio genéticamente codificado (GCaMP5) que es expresado en las neuronas motoras VC del nematodo. Al reportar los cambios en la concentración de Ca2+, GCaMP5 indica in vivo el estado de la actividad neuronal. Para determinar la actividad de GCaMP5 se utilizó microscopía de epifluorescencia y una cámara de alta sensibilidad. Las observaciones mostraron que en el knock out de mctp-1 no hay modificaciones aparentes en las oscilaciones de Ca2+, ni en el número ni en el tiempo entre eventos. Además, no se modificaron en la misma medida al exponer a los nematodos a soluciones de alta o baja osmolaridad. Estos resultados sugieren que pese a la no expresión neuronal de mctp-1 y la clara alteración en conductas motoras y tasa de ovoposición, el número y la frecuencia de transitorios de Ca2+ sugieren que no hay alteraciones evidentes en la transmisión sináptica, por lo que MCTP-1 podría estar jugando un papel río abajo a los eventos de exocitosis implicados en la liberación de neurotransmisores.
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1839
Other Identifiers: C. elegans
mctp-1
motoneuronas
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