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Title: "Construcción de vectores para la expresión de un gen sintético de proquimosina de búfalo (Bubalus bubalis) por Aspergillus niger"
metadata.dc.creator: JUAN PABLO MORÁN TORRES
Keywords: BIOLOGÍA Y QUÍMICA;QUÍMICA
metadata.dc.date: Dec-2017
Description: "En quesería diversas proteasas pueden ser utilizadas durante la etapa de coagulación, aunque las quimosinas son las preferidas porque su elevada especificidad impide el desarrollo de sabores amargos indeseables. Debido a la escasez de quimosina bovina, desde hace 30 años ésta ha sido obtenida mediante tecnología de DNA recombinante. Sin embargo, en el reino animal existen quimosinas con propiedades interesantes que todavía no han sido explotadas, como la quimosina de búfalo, cuya proporción entre capacidad coagulante y actividad proteolítica general (C/P) es tres veces mayor que en la quimosina bovina. Para obtenerla por fermentación a través de Aspergillus niger, se construyó un dispositivo de expresión basado en un cDNA sintético de la proquimosina de búfalo fusionado al extremo-C truncado del ORF de la glucoamilasa A, y regulado a nivel transcripcional por el promotor inducible de glaA. En una versión alternativa se utilizó el promotor de la glucoamilasa B de A. oryzae con la intención de probar la expresión específicamente en estado sólido. Se obtuvieron 9 transformantes donde se comprobó la integración del vector con PglaA y 12 transfromantes del vector con PglaB. Para limitar la degradación de la quimosina se diseñó un vector para la interrupción del gen de la proteasa nativa mayoritaria (pepA) pero no fue posible aislar la construcción correcta."
"In the cheesemaking process a variety of proteases could be used during the coagulation step, but chymosins are the preferred type because their high specificity prevents the development of unwanted bitterness during ripening. Due to limitations of bovine chymosin, it has been obtained by recombinant DNA technology since 30 years from now. However, some alternative gene sources of chymosin are still unexploited, such as buffalo chymosin, in which the ratio (C/P) between coagulating activity and general proteolytic activity is a three-fold superior than bovine chymosin; also, its use might be suitable for buffalo milk cheeses. Towards a genetic manipulation of Aspergillus niger for its expression, a synthetic buffalo prochymosin cDNA was fused to a truncated c-terminal glucoamylase A ORF, transcriptionally regulated by the glaA promoter for inducible expression. An alternative expression device was built with the glucoamylase B promoter from A. oryzae, in order to assess specific expression in solid-state fermentation. Nine transformants with a verified integration of PglaA vector were obtained, and 12 for the PglaB vector. A replacement vector for the major native protease (pepA) was designed in order to limit chymosin degradation, however, the correct construction could not be isolated."
URI: http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/1381
Other Identifiers: quimosina recombinante
péptido de fusión
promotor heterólogo
recombinant chymosin
fusion peptide
heterologous promoter
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